细菌与酵母表刚面展示技术.pptVIP

细菌表面展示技术酵母表面展示技术第七组;定义：细菌表面展示技术是利用基因工程手段将某一蛋白或短肽段（靶蛋白）与微生物外膜蛋白（载体蛋白）以融合蛋白的形式呈现在细胞表面。;外源蛋白与载体蛋白结合方式;细菌表面展示系统;早期研究多集中在革兰氏阴性菌。原因是遗传背景清楚，便于控制蛋白展示。;缺点：转化率低，限制构建较大容量的肽库；一些革兰氏阳性菌分泌大量蛋白酶，这会给应用带来麻烦。;细菌表面展示技术，结合荧光激活细胞筛选仪或流式细胞筛选仪，是非常有效的高通量筛选方法。;与传统的生物陶选技术相比，荧光激活细胞筛选仪具有以下特色①高富集比②高阳性率③避免“亲和效应”;基于冰核蛋白的狂犬病毒糖蛋白细菌表面展示;综上所述，细菌表面展示系统灵活多样，操作简便，在多个领域显示出广泛的应用前景，随着新的载体系统的发展和其自身的不断完善，细菌表面展示技术必将在实践中发挥更大的作用。;酵母表面展示技术;原理;简介： 酵母表面展示系统是继噬菌体展示技术创立以后发展起来的展示系统。酵母的蛋白质折叠和分泌机制与哺乳动物的细胞非常相似，对人的蛋白质表达和展示具有优越性。酵母细胞颗粒大，可用流式细胞仪进行筛选和分离。目前报道的两种酵母展示系统分别以α-凝集素作为融合骨架。;1.目的蛋白-α-凝集素表面展示系统; Schreuder等将来自瓜儿豆胶的α-半乳糖苷酶的基因插入到酿酒酵母转化酶分泌信号和α-凝集素C端部分编码序列之间。α-半乳糖苷酶和α-半乳糖苷酶-α-凝集素（α-Gal-ACI）融合蛋白，均由固有的磷酸果糖激酶(PGK)启动子控制，并且是多拷贝的。批量培养过程中检测了细胞和生长介质中的酶活性，α-半乳糖苷酶被高效分泌入培养介质，而αGal-ACI融合蛋白主要与细胞有关。;2.α-凝集素-目的蛋白表面展示系统; 天然α-凝集素结合活性部位在Aga2p的C端，因此，此处代表了一个细胞外大分子的可及性区域和展示固定蛋白质的有用位点。 酵母有两种交配类型MATa和MATa的单倍体细胞，这两种细胞之间的相互交配融合是通过细胞表达α-凝??素和α-凝集素的相互作用介导的。;目前，酵母表面展示技术被广泛应用于蛋白质分子的相互识别、定向进化以及新型疫苗的研制等发面。①蛋白质的定向进化：酵母表面展示系统用于蛋白质亲和力和稳定性的定型进化已有成功报道，最先被用于抗体的亲和力成熟;②活的口服疫苗：在细胞表面表达的蛋白质易于接近抗体，因此，可被免疫系统识别，即使很小的肽，当展示在细胞表面时，也具有免疫原型。因而可通过在酵母表面表达异质性的抗原蛋白来发展疫苗。 酵母是个足够大的颗粒，可用流式细胞仪进行筛选和分离，这就使得基于特异定量亲和力改变的的突变体分离成为可能。由于酵母展示的蛋白质是紧密锚定在细胞壁上，可以耐受SDS等的抽取，同时酵母有发酵特性且生长快，因此在工业上具有很好的应用前景。; 前景： 表面展示技术日新月异，酵母展示系统在不断的完善和改进，在多个领域得到广泛应用。由于其是真核细胞展示系统，对于哺乳动物蛋白质，尤其是人的蛋白质的展示具有独特的优越性，相信随着此技术的不断完善，在蛋白质分子的研究方面发挥越来越重要的作用。;谢谢观赏