基于滚环DNA扩增和纳米材料的生物传感分析方法研究-分析化学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 湖南大学学位论文原创性声明 湖南大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其 他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个 人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果 由本人承担。 作者签名： 讪首娟 日期：2。／占年／月舌日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查 阅和借阅。本人授权湖南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关 数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位 论文。 本学位论文属于 1、保密O，在 年解密后适用本授权书。 2、不保密毗 (请在以上相应方框内打“√”) 作者签名： 劢许娟 日期：加∥年g月6日 导师签名： 塑儒 13期：即膨年彳月占日 万方数据 博士学位论文摘 博士学位论文 摘 要 随着分析科学的不断发展，生命科学领域中蛋白质、核酸、酶活性以及生物 小分子的相关信息越来越多地需要借助于生物传感技术进行分析和检测取得。快 速，准确的获取这些生命分子的信息对生物医学，临床诊断和治疗具有非常巨大 的意义。近年来，新的分子生物技术不断涌现，并在科学研究和实际应用中得到 不断的发展和完善。然而，随着医学诊断水平的不断提高和科学研究的持续深入， 对生物分子检测方法的要求也越来越高。开发一些高灵敏度、高特异性、高准确 性、低成本、简单快速的定性或定量的分析方法以更好的满足研究和实际应用的 需要成为分析化学科研工作者面临的重大挑战。本论文针对上述问题，基于滚环 DNA扩增技术和新型纳米材料发展了一系列高灵敏度、高特异性的生物分析方法 用于酶活性、核酸、蛋白以及小分子检测，并进一步通过对实际样品的分析，初 步验证了这些技术的可行性、可靠性以及准确性。具体内容如下： 人鸟嘌呤糖基化酶(hOGGl)由于具有修复DNA氧化损伤的能力而在维持生 命体基因完整度上发挥着重要作用。hOGGl的表达水平与很多包括癌症在内的疾 病紧密相关。在第2章中，我们构建了一种新颖的荧光“light—up”型的生物传感器 用于高灵敏检测hOGGl活性。该方法的建立基于目标物诱导形成5’端磷酸化探针 和能够产生自催化DNA酶的滚环扩增技术。该方法对hOGGl的检测限可低至 O．001 U／mL，如此低的灵敏度主要归因于基本没有增加的背景信号和我们构建的 双信号放大策略。据我们所知，这是检测碱基修复酶的方法中最灵敏的检测方法 之一。同时，该方法对可能影响目标物检测的干扰酶体现出很好的特异性，在实 际样品的分析中有很大的应用潜力。 单核苷酸多态性，是指基因组水平上单个核苷酸的变异，是最常见的遗传变 异类型。如果突变发生在遗传基因的编码区，可能会引起所编码的蛋白质结构或 功能的改变，从而引起基因疾病的发生。发展高灵敏，高特异性的检测方法用于 单核苷酸多态性的检测对产前基因诊断具有重要意义。在第3章中，我们利用Ecoli DNA连接酶对单碱基错配的高特异性识别能力，结合上一章的滚环扩增技术和 DNA酶循环放大技术构建了一种高灵敏和高特异性检测单核苷酸多态性的分析方 法。挂锁探针只能与完全互补的目标DNA杂交后才能被Ecoli DNA连接酶连接成 环，并引发级联信号放大反应。错配的DNA与挂锁探针不能发生完全杂交，Ecoli DNA连接酶能够识别不完全杂交的探针，因此，挂锁探针不能连接成环形探针， 进而没有级联信号放大反应的发生，检测不到荧光信号。该分析方法对单核苷酸 多态性具有很好的检测性能，对目标DNA检测的线性范围为O．01-1 nM，检测下 II 万方数据 基于滚环DNA 基于滚环DNA扩增和纳米材料的生物传感分析方法研究 限为2．6 pM。此外，由于DNA连接酶在连接位点对单碱基错配的识别能力，该方 法在野生型和突变型以不同比例混合的样品中对突变型的DNA具有很好的特异 性。 核酸内切酶IV(Endo IV)，作为一种DNA修复酶，主要修复由脱碱基位点造 成的DNA损伤，因此，在维持基因完整度方面发挥着重要作用。在第4章中，我们 证明了Endo IV对单链DNA(sDNA)中脱嘌呤／脱嘧啶位点(AP)的裂解能力。我 们发现，Endo IV对ssDNA中的AP位点有很好的裂解能力相比于对双链DNA中AP 位点的酶切活性。进一步地，我们利用Endo IV裂解ssDNA中AP位点性质构建了一 种双信号放大体系用于高灵敏检测酶和蛋白的活性。双信号放大体系主要是将核 酸外切酶III(Exo III)辅助的信号放大方法和滚环扩增