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第二章高效液相色谱法 一、高效液相色谱法 的特点 二、流程及主要部件 三、影响分离的因素 四、高效液相色谱法 的主要分离类型 液相色谱仪（1） 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 液相色谱仪（5） 一、高效液相色谱法的特点 1．高效液相色谱法与气相色谱法比较 （1）应用范围不同 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。据统计只有大约20%的有机物能用气相色谱分析；而液相色谱适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析，大约占有机物的70 ~ 80%。 （2）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质在液相中的传质速率慢，而在气相色谱中气体的传质速率要快得多。 （3）液相色谱能完成难度较高的分离工作 ①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了一个因素。 ②液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余地大；而气相色谱并不可能的。 ③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般有利于色谱分离条件的选择，而气相色谱一般都在较高温度下进行的。 2．高效液相色谱法与经典液相色谱法比较 高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。 例如对氨基酸分离，用经典色谱法需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。 又如用25cm×0.46cm的Lichrosorb－ODS(5μ)的柱，采用梯度洗脱，可在不到0.5h内分离出尿中104个组分. 小结 综上所述，高效液相色谱法是吸取了气相色谱与经典液相色谱的优点，具有高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广等优点。 目前高效液相色谱法已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。 高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。 二、流程及主要部件 2.主要部件 (2) 梯度淋洗装置 (3) 进样装置 (4) 高效分离系统 (5) 高效液相色谱检测器 光电二极管阵列检测器 （6） 数据处理系统 色谱工作站的功能： 色谱参数的选择和设定； 自动化操作仪器； 色谱数据的采集和存储，并作“实时”处理； 对采集和存储的数据进行后处理； 自动打印，给出一套完整的色谱分析数据和图谱。 同时也可把一些常用色谱参数、操作程序，及各种定量计算方法存入存储器中，需用时调出直接使用。 1. 固定相及分离柱 2. 流动相及流动相的极性 流动相组成 选择流动相时应注意的几个问题： 四、 高效液相色谱法的主要分离类型 3. 离子交换色谱 五、高效液相色谱法的应用 1. 在食品分析中的应用 1)食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类等； 2)食品添加剂分析：防腐剂、着色剂等； 3)食品污染物分析：霉菌毒素等。 2. 在环境分析中的应用 多环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药残留等。 五、高效液相色谱法的应用 3. 在生命科学中的应用 1) 低分子量物质，如氨基酸、糖类、维生素等的分离和测定。 2) 高分子量物质，如蛋白质和酶的纯化、分离和测定。 4. 在医学检验中的应用 1）合成药物：抗生素、抗忧郁药物等。 2）天然药物生物碱（鸦片碱）等 5．在无机分析中的应用 阳、阴离子的分析等。 * * 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 （4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。 1.流程 高压输液系统 —— 进样系统 —— 分离系统—— 检测系统 —— 数据处理系统 Agilent 1100 LC的主要部件 (1) 高压输液系统 主要部件之一，包括贮液装置、高压输液泵、过滤器、脱气装置等 高压输液泵压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 基本要求： 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳 定可调、耐腐蚀等特性 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混