第三章植物脱毒术.pptVIP

第3章 植物脱毒技术 二、植物脱毒的意义 “脱毒苗”或“无病毒苗”，是指不含有该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的苗木。 通过植物组织培养方法生产无病毒种苗可以同时除去真菌、细菌和线虫的寄生，因此产量大幅度增加，最高可增产300％，平均增产也在30％以上。 第二节植物脱毒方法 一、茎尖分生组织培养脱毒 二、热处理脱毒 三、热处理结合茎尖脱毒 四、其它脱毒方法 2、拨取茎尖与接种 在超净工作台上，用解剖刀将仔细剥离幼叶，至出现裸露的生长点，用刀尖切下带1－2个叶原基的生长点，将切下的茎尖转移至培养基上，每管接1－2个茎尖。 3、培养 接种后的材料在25±2℃，每天光照10－16h条件下培养。培养2个月左右，在茎尖再生出小绿芽，小的茎尖则需3个月以上，有的甚至更长时间才发生绿芽。其间应更换新鲜培养基。 4、生根诱导 一些植物茎尖培养形成绿芽后，基部很快发生不定根，而另一些植物不产生不定根，必须将无根绿苗再诱导，才能生根成为完整植株。方法：将2－3cm高的无根苗转入生根培养基，继续培养1－2个月即可形成根。 茎尖培养脱毒过程图 茎尖剥离（1） 茎尖剥离（2） （三）影响茎尖脱毒培养的因素 （1）茎尖大小：茎尖大小与脱除病毒的效果成反相关，即剥取茎尖越小，脱毒效果越好。但茎尖大小与茎尖的成活率成正相关，即茎尖越小培养难度越大，成活率越低。考虑到脱毒效果及提高成活率，一般切取0.2～0.5 mm带1～2个叶原基的茎尖为培养材料。 （2）培养条件：在茎尖培养中，光下培养的效果通常比暗培养效果好。 （3）外植体的生理状态：茎尖最好从活跃生长的芽上切取，一般地培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。 二、热处理脱毒 1. 原理 利用病毒耐热性差的特点，将植物组织置于高于正常温度的环境中，组织内部的病毒受热以后部分或全部钝化，但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。 2.热处理的方法 (1)温汤浸渍处理 适用于休眠器官、剪下的接穗或种植材料的脱毒处理。方法是将材料放在50～55℃的温水中浸渍数分钟至数小时。此方法简便易行，但易造成材料受伤。 (2)热空气处理 适用于生长期植物材料的脱毒处理。设备可采用有照明、通风、调温、给水动能的培养箱。方法是将待处理植株先进行盆栽，成活后移入35～40℃的培养箱中处理几十分钟至几个月。 3.热处理脱毒的优点与局限性 (1)优点：对设备要求不高，技术简单，短时间可除去病毒。 (2)局限性： ●热处理不能脱除所有病毒，此法只对那些球形病毒和线形病毒有效。而对杆状病毒不起作用。 ●同时同样的处理效果也不一样（具有不确定性）。 ●对植株有伤害，只有部分植株成活。 ●对寄主植物进行较长时间的高温处理有可能钝化植物组织中的阻抗因子，使寄主植物中抗病毒因子难于活化，从而增加无效植株的发生率。 三、热处理结合茎尖脱毒 四、其它组织培养脱毒方法 （四）花药培养脱毒 草莓花药培养可产生无病毒植株。草莓花药培养脱毒率高于茎尖脱毒苗率，一般可达80％以上，有些报道可达100％ （六）化学处理 许多化学药品（包括嘌呤、嘧啶类似物、氨基酸、抗菌素等）在植物体内和植物叶片内，进行其抑制病毒的增殖或使之不活化的测定，在某种程度上抑制了病毒的增值或不活化。整株植物用化学疗法不能除去病毒，但离体培养和原质体培养效果明显。 第三节 脱毒苗的鉴定 （一）指示植物检测法 （二）抗血清检测法 （三）酶联免疫吸附检测法 （四）其它鉴定方法 （一）指示植物检测法 指示植物检测是利用病毒在植物体上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的依据，也叫枯斑测定法。这种专门用以产生局部病斑的寄主称为指示植物，又称鉴别寄主。 1.汁液涂抹法： 2.嫁接鉴定法： 适用于木本多年生果树和草莓、甘薯等无性繁殖的草本植物，采用汁液接种法比较困难，通常采用嫁接接种的方法，以指示植物作砧木，被检测植物作接穗，可采用劈接、靠接、芽接等方法嫁接。 对指示植物的要求 应根据不同的病毒选择适合的指示植物。 所选指示植物一年四季都容易栽培。 能够在较长时期内保持对病毒的敏感性。 容易接种。 较广的范围内具有同样的反映。 指示植物一般有两种类型：一种是接种后产生系统性症状，其出现在病毒扩展到的植物非接种部位，通常没有局部病斑明显；另一种是只产生局部病斑，常由坏死、褪绿或环斑构成。 指示植物检测法的优缺点 (1)优点：条件简单，操作方便，是一种经济有效的检测方法，所以大多数植物检测用指示植物检测法。 (2)缺点：不能测出病毒总的核蛋白浓度，而只能测出病毒的相对感染力。 （二）抗血清