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丹酚酸B对局灶性脑缺血小鼠抑制自噬及凋亡机制的研究-神经病学专业论文.pdf.docxVIP

丹酚酸B对局灶性脑缺血小鼠抑制自噬及凋亡机制的研究-神经病学专业论文.pdf.docx

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丹酚酸B对局灶性脑缺血小鼠抑制自噬及凋亡机制的研究-神经病学专业论文.pdf

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学,试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则,承担相应法律责任。 研究一蝌徊签融二级学黼痞‘一。。+-,t一’。。i÷I,J ;i一. 一童. ; 加莎年:争月多j日j. 、、。.i, ∥t’。 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名:/f TgIJ雠:/豌 沙哆年事月多。日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 6 研究论文丹酚酸B对局灶性脑缺血小鼠抑制自噬及凋亡机制的研究 前言日{j舌 .13.1j 材料与方法 ..14 结果 ..3 1 附图 ..39 讨{仑 .49 结论 .5 1 参考文献 5 1 综述缺血半暗带概念的进展 55 致谢 58 个人简历 ..60 万方数据 中文摘要丹酚酸B对局灶性脑缺血小鼠抑制自噬及凋亡机制的研究 中文摘要 丹酚酸B对局灶性脑缺血小鼠抑制自噬及凋亡机制的研究 摘 要 目的:脑血管病是导致我国成人残疾和死亡的第一原因,其中以缺血 性脑血管病最为常见。脑缺血后继发性脑损伤是病情加重及影响预后的重 要原因,氧化应激、炎症反应、细胞凋亡及线粒体功能异常、钙超载、兴 奋氨基酸毒性、自噬等因素均有参与。缺血性脑血管病机制复杂不明,目 前缺乏有效治疗手段,是亟待解决的医学问题。 急性局灶脑缺血中,氧化应激可介导梗死区域继发性神经元死亡。自 噬在缺血再灌注情况下是一把双刃剑,细胞可启动适度的自噬来清除受损 细胞器及异常折叠蛋白质,对细胞起到重要的保护作用,但不完全或过度 自噬现象可能导致细胞死亡。近来越来越多的实验证据表明,氧化应激能 诱导自噬的发生,并且,应用抗氧化剂能抑制自噬并减少细胞死亡。 丹酚酸B(Salvianolic acid B,SalB)是一种提取自丹参的水溶性单 体成分,具有强大的抗氧化作用及其他多种生物学活性。SalB可以通过 抑制凋亡的机制保护缺血心肌细胞,也有文献报道SalB可通过抑制自噬 来保护饥饿状态的心肌细胞。 本实验旨在研究SalB这一氧自由基清除剂对急性期局灶性脑缺血小 鼠是否存在脑保护作用,且其作用机制是否为抑制凋亡及自噬水平。 方法:采用雄性CDl小鼠(体重25.309),应用改良Longa法建立小 鼠右侧pMCAO模型。实验分为三部分: 实验一:探究SalB对急性期局灶性脑缺血小鼠的脑保护作用 小鼠随机分为4组:Sham组(Sham+生理盐水)、pMCAO组(pMCAO+ 生理盐水)、丹酚酸B低剂量组(pMCAO+SalB 10mg/kg,Sal—L)、丹酚 酸B高剂量组(pMCAO-I-SalB 25mg/kg,Sal—H)。各组小鼠按照统一标准 进行麻醉与造模,造模成功后,药物干预组即刻腹腔注射SalB,Sham组 和pMCAO组用则给予等量生理盐水。术后24 h采用Longa法及Clark 法对小鼠进行神经功能缺损评分。评分完毕后将动物断头处死,用干湿重 法测定脑组织含水量,用TTC染色法测定脑梗死体积,用伊文斯兰染色 法测定血脑屏障通透性,用western blot测定紧密连接蛋白Claudin一5的含 万方数据 中文摘要量,用尼氏染色法测定梗死交界区神经细胞损伤情况,用电镜观察超微结 中文摘要 量,用尼氏染色法测定梗死交界区神经细胞损伤情况,用电镜观察超微结 构改变(梗死皮层超微结构如自噬体的形成、细胞凋亡情况和微血管损伤 情况等)。 实验二:局灶性脑缺血小鼠各因子分区表达 对Sham及pMCAO组小鼠于术后24h行免疫组织化学染色测定LC3、 beclinl、p62、bcl2、bax、Caspase.3的阳性细胞分布情况及计数情况。行 免疫荧光染色观察beclinl及Caspase.3是否存在共标。观察western blot 测定PGC—lQ及Sirtl的分区表达。 实验三:SalB脑保护作用机制的探究 首先,根据因子分区表达情况选定测定的分区:LC3、beclinl、p62 于梗死周边区观察;bcl2、bax、cleaved Caspase.3于梗死中心区观察。应 用western blot及RT-qPCR进行测定Sham组、pMCAO组、Sal.L组、Sal.H 组相应分区各因子的蛋白、mRNA含量的变化。

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