第二章浩微生物发酵产酶.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * ???? 2.控制阻遏物浓度 微生物酶的生产受到代谢末端产物的阻遏和分解代谢物阻遏的调节。为避免分解代谢物的阻遏作用，可采用难于利用的碳源，如在β-半乳糖苷酶的生产中，只有在培养基中不含葡萄糖时，才能大量诱导产酶。 3.添加表面活性剂/(产酶促进剂） 改变细胞的通透性或对酶分子有一定的稳定作用如在霉菌的发酵生产中添加 1%的吐温可使纤维素酶的产量提高几倍到几十倍。? 第四节 酶发酵动力学 主要研究发酵过程中细胞生长速度，产物生成速度，基质消耗速度以及环境因素对这些速度的影响等。 一、细胞生长动力学 研究细胞生长速率以及外界环境因素对细胞生长速率影响的规律。 在培养成分一定时，微生物的生长一般分五个阶段 延缓期（适应期） 对数生长期 减速期 静止期（平衡期） 衰退期（死亡期） 营养物浓度（生长限制基质浓度）和生长速率之间的动力学关系：Monod模型 μ:比生长速率（1/h） （specific growth rate） μm：最大比生长速率（1/h） S：营养物浓度（生长限制基质浓度） 克/L Ks：莫诺德常数或饱和常数或营养物利用常数克/L，或 mol/L 二、 酶生物合成的模式 根据酶的合成与细胞生长之间的关系，可将酶的生物合成分为3种模式，即： 同步合成型 生长偶联型—— 中期合成型 部分生长偶联型——延续合成型 非生长偶联型 —— 滞后合成型 1. 生长偶联型（又称同步合成型） 酶的生物合成与细胞生长同步。 特点：酶的合成可以诱导，但不受分解代谢物阻遏和产物的反馈阻遏。 当去除诱导物、细胞进入平衡期后，酶的合成立即停止。 生长偶联型中的特殊形式——中期合成型 酶的合成在细胞生长一段时间后才开始，而在细胞生长进入平衡期以后，酶的合成也随着停止。 特点：酶的合成受产物的反馈阻遏或分解代谢物阻遏。 枯草杆菌碱性磷酸酶合成曲线 2.部分生长偶联型（又称延续合成型） 酶的合成在细胞的生长阶段开始，在细胞生长进入平衡期后，酶还可以延续合成较长一段时间。 特点：可受诱导，一般不受分解代谢物和产物阻遏。 黑曲霉聚半乳糖醛酸酶合成曲线 3. 非生长偶联型（又称滞后合成型） 只有当细胞生长进入平衡期以后，酶才开始合成并大量积累。许多水解酶的生物合成都属于这一类型。 特点：受分解代谢物的阻遏作用。 黑曲霉酸性蛋白酶合成曲线 酶生产中最理想的合成模式： 延续合成型：发酵过程中没有生长期和产酶期的明显差别。细胞开始生长就有酶的产生，直至细胞生长进入平衡期后，酶还可以继续生成一段时间。 对于： 同步合成型：提高对应的mRNA的稳定性，如降低发酵温度 。 滞后合成型：尽量减少甚至解除分解代谢物阻遏，使 酶的合成提早开始。 中期合成型：要在提高mRNA稳定性以及解除阻遏两方 面努力。 三、 产酶动力学 主要研究在发酵过程中细胞产酶速度以及各种环境因素对产酶速度的影响规律。 产酶动力学根据研究的着眼点不同，可分为： 宏观产酶动力学（非结构动力学）:研究群体细胞的产酶速度及其影响因素（整个发酵系统的角度）。 微观产酶动力学（结构动力学）:研究细胞中酶合成速率及其影响因素（细胞内部的角度）。 一般产酶动力学方程可表达为： 式中 X——细胞浓度(g /L) ?——细胞比生长速率(h-1) ?——生长偶联的比产酶系数(IU/g) ?——非生长偶联的比产酶速率(IU/(g?h)) E——酶浓度(IU/L) t——时间(h) 生长偶联型 部分生长偶联型 非生长偶联型 第五节 固定化微生物细胞发酵产酶 又称固定化活细胞或固定化增殖细胞，用各种方法固定在载体上，在一定的空间范围内生长、繁殖和新陈代谢的细胞. 在发酵生产淀粉酶,蛋白酶,纤维素酶等胞外酶方面取得了成功. 一、固定化细胞发酵产酶的特点1.提高产酶率 2.可在高稀释度下连续发酵 3.基因工程菌的质粒稳定,不易丢失;4.发酵稳定性好5.缩短发酵周期,提高设备利用率;6.产品容易分离纯化;7.适于胞外酶等胞外产物的生产. 二、固定化细胞发酵产酶的工艺条件控制与游离细胞发酵大同小异,需特别注意