芸薹生链格孢(alternaria点 brassicicola)a都bste5基因的克隆及功能研究.docxVIP

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2019-01-18 发布于福建
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芸薹生链格孢(alternaria点 brassicicola)a都bste5基因的克隆及功能研究

关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文，同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》并向社会公众提供信息服务。保密论文在解密后应遵守此规定。导师一趁铲獭日期：巡!茎：■1 万方数据英文缩略词及中文对照表英文缩略词及中文对照表万方数据目目录文摘要一～一中舢耐 m吨一～ Ⅱ 1亩百言 1．1链格孢菌研究概况一1 1．1．1链格孢菌的危害一l 1．1．2芸薹生链格孢菌的危害一2 1．1．3芸薹生链格孢菌病害的综合防治一2 1．1．4链格孢属真菌的致病性机制一4 1．2真菌蛋白激酶的研究现状．6 1．2．1蛋白激酶在信号转导途径中的作用与意义一6 1．2．2蛋白激酶的分类研究。6 1．2．3丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase，MAPK) 一7 1．2．4真菌MAPK信号转导途径的研究现状 7 1．3真菌MAPK信号转导途径三级激酶特异性互作机制 9 1．3．1支架蛋白的研究 10 1．4研究的目的和意义 14 2材料与方法。15 2．1材料 15 2．1．1供试菌株．15 2．1．2质粒 15 2．1．3酶和主要的试剂．15 2．1．4仪器与设备．15 2．1．5培养基及溶液配制．1 5 2．2实验方法 16 2．2．1基因组DNA的提取(CTAB／NaCl法) ．16 2．2．2 cDNA的合成．17 2．2．3引物设计及Ste5基因克隆 18 212．4 PCR产物回收及测序 19 万方数据 2．2．5基因序列分析 2．2．5基因序列分析．20 2．2．6打靶载体的构建．2l 2．2．7原生质体转化．25 2．2．8 AbSte5转化子的筛选验证 26 2．2．9 AbSte5基因缺失突变体的southern杂交 27 2．2．10AbSte5基因缺失突变体的性状功能研究一30 2．2．11 AbSte5基因缺失突变体的互补研究 31 3结果与分析。34 3．1 A．brassicicola AbSte5基因的克隆 34 3．1．1爿．brassicicola AbSte5基因的查找 34 3．1．2Abrassicicola蛋白激酶AbSte5基因的克隆 35 3．2基因序列分析 36 3．2．1 AbSte5基因的保守区分析 36 3．2．2相似性比对．36 3．3 AbSte5基因缺失突变载体(打靶载体)的构建及验证 37 3．3．1质粒的酶切 38 3．3．2打靶载体菌落PCR验证。39 3．3．3打靶片段的PCR扩增一40 3．4 AbSte5基因缺失突变体的筛选和验证 40 3．4．1 AbSte5基因缺失突变体的PCR验证 40 3．4．2 AbSte5基冈缺失突变体的RT-PCR验证．41 3．5 AbSte5基因缺失突变体的Southem杂交 42 3．6 AbSte5基因缺失突变体的互补体验证 43 3．6．1 AbSte5全基因的克隆 43 3．6．2 AbSte5基因缺失突变体的互补体验证 43 3．7 AbSte5基因缺失突变体的生物学性状检测 44 3．7．1 AbSte5基因缺失突变体的菌落表型观察 44 3．7．2 AbSte5基因缺失突变体的分生孢子观察 47 3．7．3 AbSte5基因缺失突变体的致病性检测 48 3．7．4 AbSte5基因缺失突变体的黑色素定量分析 49 万方数据万方数据万方数据 4讨论 4讨论。．50 4．1关于Ste5支架蛋白的研究 50 4．2茵体总RNA提取．50 4-3 AbSte5基因的功能推测 50 5结论。52 参考文献一53 ：i变谢 5≤； ili 万方数据万方数据山东农业大学全只制硕士专业学位论文中文摘要山东农业大学全只制硕士专业学位论文中文摘要芸薹生链格孢(Alternaria brassicicola)引起的黑斑病是十字花科蔬菜农业生产上的一大难题，早期研究显示，Fus3-MAPK信号途径在A．brassicicol