依鲁替尼对ox时-ldl诱导的巨噬细胞泡沫化和焦亡的调节作用及其与nlrp3炎症小体关系的研究.docx

目 目 录 一、摘要 1 (一)中文摘要 l (二)英文摘要 4 二、正文 7 第—部依鲁替尼对ox．LDL诱导的巨噬细胞NLRP3炎症小体激活的 作用 、—U—L (一)月IJ岙 7 (二)材料和方法 1 0 1．材料 l 0 2．方法 12 2．1 THP．1和THP．1．de肌RP3细胞的培养 ．12 2．2巨噬细胞的诱导转化 ．．13 2．3细胞实验分组 13 2．4 Elisa检测 ．．1 4 2．5 Western Blotting实验 l 5 2．6统计分析 ．1 6 (三)结果 ．．1 6 1．PMA诱导THP．1单核细胞转化为巨噬细胞 ．16 2．依鲁替尼对OX-LDL诱导的THP．1起源的巨噬细胞几一1p释 放的影响 16 万方数据 3．依鲁替尼对OX．LDL诱导的THP一1起源的巨噬细胞IL—lp前体表达的影响 3．依鲁替尼对OX．LDL诱导的THP一1起源的巨噬细胞IL—lp前 体表达的影响 ．． 17 4．依鲁替尼对OX—LDL诱导的THP一1起源巨噬细胞caspase一1激 活的影响 ．．18 5．依鲁替尼对OX—LDL诱导的THP．1起源巨噬细胞NLRP3蛋白 表达的影响 ．．18 (四)讨论 19 (五)结论 22 (六)参考文献 23 第二部依鲁替尼对OX．LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的影响 (一)前言(一)H!J舌 29Zy (二)材料和方法 31 1．材料 ．．31 2．方法 ．．34 2．1 THP．1和THP．1．de烈LRP3细胞的培养 ．34 2．2巨噬细胞的诱导转化 35 2．3泡沫细胞的形成 ．35 2．4细胞实验分组 35 2．5油红O染色 ．．35 2．6细胞内总胆固醇酶法测定 ．36 2．7细胞内游离胆固醇酶法测定 ．．36 2．8荧光探针标记法测定巨噬细胞吞噬功能实验 ．．36 万方数据 2．9巨噬细胞胆固醇外流率测定 2．9巨噬细胞胆固醇外流率测定 37 2．10 Westem Blotting实验 37 2．11统计分析 38 (三)结果 ．38 1．依鲁替尼、MCC950及NLRP3基因敲除对OX．LDL诱导的 THP．1起源巨噬细胞泡沫化的影响～ ．38 2．依鲁替尼、MCC950及NLRP3基因敲除对THP．1起源巨 噬细胞OX．LDL摄入的影响 39 3．依鲁替尼、MCC950及NLRP3基因敲除对THP．1起源巨噬 细胞CD36和SR—A蛋白表达的影响 ．．40 4．依鲁替尼、MCC950及NLRP3基因敲除对THP一1起源的巨 噬细胞ACATl和nCEH蛋白水平的响 ．．41 5．依鲁替尼、MCC950及NLRP3基因敲除对THP．1起源巨噬 细胞胆固醇外流的影响 ．．42 6．依鲁替尼、MCC950及NLRP3基因敲除对THP．1起源巨噬 细胞ABCAl、ABCGl和SR-BI蛋白水平的影响 ．43 (四)讨论 ．．44 (五)结论 ．．49 (六)参考文献 ．50 第三部分依鲁替尼对ox．LDL诱导的巨I氅细胞焦亡的作用 (一)前言(一)甘¨舌 ．． ．．5．) 60 (二)材料和方法 ．58 万方数据 1．材料 1．材料 ．58 2．方法 ．．60 2．1 THP．1和THP一1．d。fNLRP3细胞的培养 ．60 2．2巨噬细胞的诱导转化 ．61 2．3 HUVEC细胞的培养 ．．6 1 2．4细胞实验分组 ．．62 2．5 TUNEL染色 ．62 2．6乳酸脱氢酶(LDH)释放检测 63 2．7 Hoechst33342和碘化丙啶(PI)双染 ．．64 2．8 Transwell测定细胞迁移 64 2．9划痕法检测细胞迁移 ．6 4 2．1 0单核细胞内皮细胞粘附实验 ．64 2．1 1统计分析 ．6 5 (三)结果 65 1．依鲁替尼对OX．LDL诱导的THP．1起源巨噬细胞LDH释放的 作用 65 2．依鲁替尼对OX—LDL诱导的THP一1起源巨噬细胞细胞膜破坏 作用的影响 66 3．依鲁替尼对OX．LDL诱导的THP．1起源巨噬细胞DNA断裂 的作用 67 4．依鲁替尼对OX．LDL诱导的THP．1单核细胞迁移的影响 69 5．依鲁替尼对OX．LDL诱导的THP．1巨噬细胞迁移的影响 70 万方数据 6．依鲁替尼对OX。LDL诱导的THP．1细胞与卸wEC细胞粘附的影响 6．依鲁替尼对OX。LDL诱导的THP．1细胞与卸wEC细胞粘附 的影响 71 (四)讨论 7 1 (五)结论 76 (六)参考文献 77 三、综述 83 (一)综述 83 (二)参考文献 ．93 四、致谢 100 万方数据 大连医科大学博士学位论文依鲁替尼对OX．LDL诱导的巨噬细胞泡沫化和焦亡的调节作用 大连医科大学博士学位论文