基因工力程复习.ppt

都属于分子水平的操作，蛋白质工程的本质是通过改造基因进而形成自然界不存在的蛋白质，所以被形象地称为第二代基因工程。 认为C选项表述的含义是正确的原因分析：具有一种或多种限制性核酸内切酶的单一切割位点是理想质粒载体的基本条件之一，同时该切割位点就是目的基因的插入位点。也就是说如果用某一特定的限制性核酸内切酶（如BamHⅠ）作用于基因工程质粒载体（如pET28b）只会产生一个切口，故认为该切口插入一个目的基因（如ada）是目的基因成功表达（如合成腺苷酸脱氨酶）的前提条件。 因此B选项表述的“每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点”是正确的。当然准确地说应该至少含有两个限制性核酸内切酶识别位点。 （1）碱基对改变（或A变成T）??? 2??? 1 （2）放射性同位素（或荧光分子等）??? —UGCACAA— 3）Ⅱ-1和Ⅱ-4??? Ⅱ-3??? Ⅱ-2 基因工程得以实现的理论基础：不同生物DNA的化学组成和结构相同，所有生物共用一套遗传密码子。 1．下列对基因工程的理解，正确的是(　　) ①可按照人们的意愿，定向改造生物遗传特性的工程 ②对基因进行人为删减或增添某些碱基 ③是体外进行的人为的基因重组 ④在实验室内，利用相关的酶和原料合成DNA ⑤主要技术为体外DNA重组技术和转基因技术 ⑥在DNA分子水平上进行操作 ⑦一旦成功，便可遗传 A．①②③④⑤⑥　　　　 B．①③④⑤⑥⑦ C．①③⑤⑥⑦ D．①②③⑤⑥⑦ C 解析：⑦一旦成功，便可遗传 因为基因工程一般是将外源基因与载体连接导入受体细胞中，载体有自我复制功能，或者能将目的基因整合到细胞自身的DNA上，这样细胞进行分裂的时候目的基因也会随质粒复制或者是细胞染色体DNA复制而复制，是可遗传。 判断正误 质粒通常存在于细菌体内，目前尚未发现真核生物体内有类似的结构 若要获得真核生物的目的基因，则一般采用人工合成方法 为育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体 基因工程经常以抗菌素抗性基因为目的的基因 错误 正确 错误 错误 用基因工程的方法培育的抗虫植物也能抗病毒 基因工程在畜牧业上应用的主要目的是培育体型巨大、品种优良的动物 基因工程在医药方面，可用于基因诊断和治疗疾病 基因工程在环境保护方面可用于环境监测和对污染环境的净化 错误 错误 正确 正确 ２．将ada（酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是A. 每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒B. 每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点C. 每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个adaD. 每个人的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 C 解析：C错误：基因工程通常不选择天然质粒直接作为目的基因的载体，而选择以天然质粒为基础，人工改造和组建形成的实用质粒作为目的基因的载体。这种实用质粒不是单纯为某一目的基因构建的，而需要有较广泛的使用功能，也就是说要能够和多种目的基因形成重组质粒。由于不同的目的基因两端的碱基序列存在差异，因此提取不同的目的基因选择的限制性核酸内切酶也不同，所以这种实用质粒就需要有多种限制性核酸内切酶的单一切割位点。 如质粒pET28b具有BamHⅠ、BglⅡ、HindⅢ等16种限制性核酸内切酶的单一切割位点，若用BamHⅠ处理质粒pET28b，在其产生的切口中插入ada形成重组质粒，该重组质粒的另外15个限制性核酸内切酶识别位点都没有插入ada。故C选项的含义错误。 解析：认为B选项表述的含义是错误的原因分析：目的基因和质粒能够形成重组质粒的关键是目的基因和质粒被限制性核酸内切酶切割后具有相同的粘性末端。形成相同的粘性末端可以采用两种方法：①用相同的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒；②用同尾酶切割目的基因和质粒。若选择同尾酶分别切割目的基因和质粒，再由DNA连接酶作用形成重组质粒。该重组质粒可能无法被同尾酶中的任何一种限制性核酸内切酶识别和切割。 如限制酶BglⅡ的识别序列为A↓GATCT（↓表示切割位点，下同），限制酶BamHⅠ的识别序列为 G↓GATCC。若用BglⅡ切割目的基因（见图1），用BamHⅠ切割质粒（见图2），可获得具有相同粘性末端序列（GATC）的DNA片段。再用DNA连接酶处理形成重组质粒（见图3），其“接点”的碱基序列为5’ AGATCC 3’，既不能被BglⅡ识别，也不能被BamHⅠ识别，故认为重组质粒可能不存在限制性核酸内切酶的识别位点。? 实际上基因工程技术的操作过程中会遇到很多问题，如重组质粒导入受体细胞后，目的基因的表达可能会出现目的基因不表达、表达水平过低或过高、表达产物的氨基酸序列差错等多种表达异常情况。当出现目的基因的表达异