电化学传感器在细胞活性氧检测及生物学效应研究中的应用-分析化学专业论文.pdf.docxVIP

研究生优秀毕业论文 目录中文摘要 目录 中文摘要 I ABSTRACT III 第1章绪论 ．．1 1．1活性氧简述 1 1．1．1活性氧的产生和性质 ．．1 1．1．2活性氧对机体的危害 一4 1．1．3活性氧的清除 ．．6 1．1．4活性氧的检测 一7 1．2活性氧及细胞损伤 1 1 1．3生物电化学传感器 12 1．3．1生物电化学传感器的发展 12 1．3．2生物电化学传感器的应用 13 1．3．3生物电化学传感器的发展趋势 13 1．4本论文的选题依据及研究思路 14 第2章超氧阴离子和一氧化氮参与小分子抑制剂威罗菲尼对黑色素瘤细胞的杀伤 。。。。。。．。。。．．．。，。。。。。。。。．。。．．。．。。。．。。。。。。。． 。。．．。。。。。。．．．．。。．。。。。。。。。。．．．．。。．．。．。。。．。。． 。。。。。。．．．。。．．．。。。。。。。。。。．。。．．。。。。。。。。。。。。。．．．】17 2．1引言 ．．17 2．2实验部分 ．．18 2．2．1材料与试剂 18 2．2．2仪器 ．18 2．2．3细胞生长能力与毒性实验 18 2．2．4电化学传感器检测02一和NO水平 19 2．2．5细胞氧化应激与线粒体膜电位的荧光分析 20 2．2．6统计分析 20 2．3结果与讨论 一21 2．3．1 PLX4032诱导的细胞生长抑制 21 2．3．2电化学传感器监测A375和MV3细胞时02一和NO的释放 21 2．3．3荧光法检测细胞内02-和NO水平 25 万方数据 2．3．4 2．3．4 02-和NO水平的上升与PLX4032诱导细胞的氧化损伤的关系 26 2．4结论 28 第3章生育酚和圣草酚对抗紫外光辐照引起细胞损伤的机理 29 3．1引言 29 3．2实验部分 30 3．2．1试剂 一30 3．2．2装置 ．．30 3．2．3电化学检测细胞释放的02一 3 1 3．2．4超氧阴离子自由基荧光染色 32 3．2．5细胞生存能力实验 32 3．2．6统计学分析 33 3．3结果与讨论 33 3．3．1非标记电化学传感器量化紫外光诱导黑色素瘤细胞产生的02一 33 3．3．2 HaCaT和A375细胞在紫外光照射下的生长能力 ．34 3．3．3生育酚可以减少紫外线诱导黑色素瘤细胞产生的02一 35 3．3．4电化学传感器预测生育酚在细胞成活能力中的保护作用 38 3．3．5对紫外线诱导细胞氧化损伤时不同检测方法比较 40 3．4结论 ．42 第4章主要结论、创新点及研究展望 43 4．1主要结论 43 4．1．1研究了超氧阴离子和一氧化氮参与小分子抑制剂威罗菲尼对黑色素 瘤细胞的杀伤 ．43 4．1．2明确了生育酚和圣草酚对抗紫外光辐照引起细胞损伤的机理 43 4．2创新点 43 4．3研究展望 44 参考文献 ．45 发表论文与科研成果 ．59 致谢 61 万方数据 中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 活性氧是生物体内一类非常不稳定的含氧化合物的总称，是有氧代谢过程中 形成的正常产物。正常情况下在生物体内细胞代谢需要活性氧，但是当机体氧化 还原平衡失调时活性氧产生增多，导致细胞损伤，引起机体病变。目前活性氧的检 测方法通常采用传统方法间接评价活性氧水平，这种方法具有耗时、检测费用高 等不足。随着生物学的快速发展，生物电化学传感器作为化学传感器中研究最 早、最深入的一个分支、它具有检测特异性强、便捷、费用低等优点。电化学传 感器用于生物分子的分析检测对获取生命过程中的化学与生物信息、了解生物分 子及其结构与功能的关系、阐述生命活动的机理以及对疾病的有效诊断与治疗都 发挥了十分重要的意义。 由于细胞中活性氧自由基产生过多会破坏细胞内的氧化还原平衡，最终导致 细胞的凋亡和死亡，因此在本论文中选用肿瘤小分子抑制剂(PLX4032)和紫外光 诱导细胞释放活性氧自由基。我们首次选用电化学生物传感器对活性氧自由基进 行定量检测，活性氧电化学传感器对分析细胞氧化损伤引起细胞凋亡的机理提供 了一种新的方法，它在抗肿瘤和抗氧化药物的的高通量筛选方面具有潜在的应用 价值。主要研究结果如下： 1．超氧阴离子和一氧化氮参与小分子抑制剂威罗菲尼对黑色素瘤细胞的杀伤 维罗菲尼(PLX4032)作为一种新型有效的BRAFv600E抑制剂，是美国食品及 药品管理局批准的用于治疗黑色素瘤的新药，可以抑制RAS／MEK／ERK信号通路 控制细胞的增殖，然而PLX4032抑制肿瘤生长时细胞氧化水平的作用还没有人研 究报道。我们首次应用电化学传感器成功的监测到PLX4032治疗黑色素瘤细胞 后，02一与NO的释放增加，PLX4032能够特异性的刺激具有BRAFV600E突变的 A375黑色