辣椒疫霉效应因子rxlr的蛋白晶体学研究-植物病理学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 辣椒疫霉效应因子RxLR 辣椒疫霉效应因子RxLR的结构生物学研塞 2．2．1生物信息学分析 ．．24 2．2．2基因克隆与表达载体的构建 ．．25 2．2．3 129044蛋白的表达 ．29 2．2．4 129044蛋白的纯化 ．32 2．2．5 129044蛋白晶体的生长和优化 ．33 2．2．6 X射线衍射数据收集和分析 ．．34 2．2．7结构解析 35 3结果与分析 36 3．1 129044生物信息学分析 36 3．1．1基本理化性质分析 ．．36 3．1．2 129044信号肽的预测 ．38 3．1．3 129044跨膜区预测 ．38 3．1．4 129044蛋白的保守区分析 ．39 3．1．5 129044蛋白的同源性分析 ．39 3．2 129044基因的克隆与表达载体的构建 41 3．3 129044蛋白的表达 4l 3．3．1 129044蛋白的试表达 ．41 3．4 129044蛋白的纯化 43 3．5 129044蛋白晶体的初筛 50 3．6 129044蛋白晶体数据收集与处理 51 3．7 129044蛋白结构的解析 52 4结论与讨论 ．54 4．1结论 ．． ．．54 4．1．1 RxLR效应因子生物学信息分析 54 4．1．2 RxLR效应因子基因的克隆和表达载体的构建 ．．54 4．1．3 RxLR效应因子蛋白表达和纯化条件的摸索 54 4．1．4 RxLR效应因子蛋白晶体生长条件的筛选 54 4．1．5 RxLR效应因子数据的收集和三维结构的解析 55 II 万方数据 山东农业大学硕士学位论文4 山东农业大学硕士学位论文 4．2讨{仑 ．55 参考文献 56 附录 ．63 致谢 ．70 硕士期间发表论文情况 71 III 万方数据 山东农业大学硕士学位论文中文摘要 山东农业大学硕士学位论文 中文摘要 辣椒疫病是一种传播范围广，危害性大的世界性土传病害，其病原Phytophthora capsici自从1922年被Leon Leonian首次确定之后，在世界各地均有发现。辣椒疫霉在 生物分类学中属于卵菌门，卵菌纲，霜霉目，霜霉科，疫霉属，它主要侵染葫芦科、 豆科、茄科、十字花科等四科约10个属的作物。辣椒疫霉对世界农业特别是辣椒生产 造成了巨大的损失。辣椒疫病常规防治方法以施用农药为主，极大程度的破坏了生态 环境。因此通过探索辣椒疫霉侵染机制研发新的防治方法迫在眉睫。 RxLR效应因子是指含有RxLR．DEER结构域，在辣椒疫霉侵染寄主时能进入寄主 细胞，抑止寄主的防卫反应，从而有利于辣椒疫霉侵入与扩展的一类蛋白。为了从蛋 白三维结构角度阐述RxLR效应因子作用机制，本研究克隆出多个RxLR效应因子基 因，对其进行了原核表达，得到高表达量的重组菌株，并对表达产物进行纯化，然后 用纯化后的蛋白进行蛋白结晶条件的筛选实验，目的是得到分辨率在3 A以上的RxLR 蛋白晶体用以进行RxLR效应因子三维结构的解析。主要结果如下： 1、本研究克隆了20多个RxLR效应因子基因，这些基因翻译的氨基酸序列都具 有R)(LR效应因子的结构域。 2、本研究尝试多种方法对表达的目的蛋白进行纯化条件的摸索，其中编码为 129044效应因子蛋白较稳定，获得了浓度大于10mg／ml，纯度在95％以上的129044 蛋白。 3、本研究对纯化好的129044蛋白进行了晶体生长条件的筛选，得到了质量较好 的蛋白晶体，在上海同步辐射光源通过x光机衍射确定晶体最高分辨率为3．4 A。 4、129044蛋白分辨率3．4 A的晶体收集到了较好的一套数据，本研究尝试对 129044蛋白晶体的结构进行解析，目前已经拿到129044硒代蛋白的晶体。 关键词：辣椒疫霉；RxLR效应因子；原核表达；蛋白纯化；蛋白结晶；结构解析 万方数据 辣椒疫霉效应因子RxLR 辣椒疫霉效应因子RxLR的结构生物学研究 Abstract Pepper phytophthora blight is a wide spread and harmful soil—borne plant diease occurred worldwide．Since the pathogeny of the Pepper phytophthora blight-Phytophthora capsici was described by leon leonian in 1 922，many parts of the world had found it infect plant． Phytophthora capsici belongs to oomycota,Peronosporales,Peronosp