蜘蛛多肽毒素JZTX-51和JZTX-26重组表达和纯化.PDF

1668 生 物 工 程 学 报 邵婕 等/蜘蛛多肽毒素JZTX-51 和JZTX-26 的重组表达和纯化 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Oct. 25, 2018, 34(10): 1668−1678 DOI: 10.13345/j.cjb.170529 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物技术与方法· JZTX-51 JZTX-26 邵婕，潘娇，瞿芳，刘子昊，丁易颖，罗莎，张学文，陈金军 410128 , , , . JZTX-51 JZTX-26 . , 2018, 34(10): 1668–1678. Shao J, Pan J, Qu F, et al. Recombinant expression and purification of spider toxin, JZTX-51 and JZTX-26, from Chilobrachys jingzhao . Chin J Biotech, 2018, 34(10): 1668–1678. 摘 要: 为建立一种简便、快速且能大量获得富含二硫键的蜘蛛多肽毒素JZTX-26 (35 aa) 和JZTX-51 (27 aa) 的 有效方法，利用PCR 的方法克隆成熟肽编码基因并插入至大肠杆菌Escherichia coli 表达载体pMAL-p2x 中与MBP (麦芽糖结合蛋白) 标签融合，构建重组表达质粒pMAL-jz26 和pMAL-jz51 。在受体菌TB1 和BL21 (DE3) 中对 两个重组表达质粒分别进行IPTG 诱导表达，通过Amylose 亲和层析柱纯化并进行SDS分析；采用因子X 对融合蛋白进行酶切后通过分子筛以及反相高效液相色谱对两种重组蛋白进行纯化。通过MALDI-TOF-TOF 质谱 鉴定，表达产物的分子量与预期的多肽理论分子量一致。1 L 表达培养液中能获得大约 5 mg 纯化的目的蛋白 JZTX-26 或 JZTX-51 。结果表明利用该原核表达体系可对蜘蛛毒素基因jztx-26 和jztx-51 进行融合表达，并对重 组蛋白进行亲和层析，为采用基因工程的手段大量获得蜘蛛多肽毒素奠定了基础。 : 蜘蛛毒素，原核表达，融合蛋白，DRG 细胞，钠离子通道 Recombinant expression and purification of spider toxin, JZTX-51 and JZTX-26, from Chilobrachys jingzhao Jie Shao, Jiao Pan, Fang Qu, Zihao Liu, Yiying Ding, Sha Luo, Xuewen Zhang, and Jinjun Chen College of Bioscience and Biotechnology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, Hunan, China Abstract: To establish a simple, quick and effective method to get a large amount of spider toxin JZTX-26 (35 aa