药物分析05体内前药物分析.pptVIP

药物分析 第五章 体内药物分析 第五章 体内药物分析 第五章 体内药物分析 第五章 体内药物分析 第五章 体内药物分析 第五章 体内药物分析 四、体内药物分析的特点 五、体内药物分析方法 其它：头发、肝器组织、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、粪便。 采集和制备 1、血样：一般从肘静脉采血，也可从毛细管采血。每次采血1-5ml，动物采血时一般不超过动物总血量的十分之一。 2、血浆：静脉离心5-10分钟，使与血细胞分离； 3、血清：静脉血放置30-60分钟。1000g离心5-10分钟。 4、全血：加抗凝剂，不离心，血浆和血细胞分布均匀。 采集方法 组织采集：先取各种组织，应用匀浆器均匀化制成水性基质匀浆液，再以适当方法萃取。 组织样品要经过蛋白沉淀：甲醇、乙腈、高氯酸、三氯乙酸沉淀。 酸、碱水解：将组织水解掉 酶水解：应用酶将组织水解掉 其它：头发等 常用体内样品预处理方法 （1）优点：①与杂质分离 ②简便 ③浓集④提取率高 （2）提取率：在有机相与水相中的溶解度的比值分配系数，一般少量多次，对生物样品一般一次萃取， 70%重现性 （3）影响提取率的因素 ①pH 碱性药物在碱性pH 酸性 酸性pH ②提取溶剂 相似相溶原理 沸点低，不影响检测,性质稳定，不起化学反应(化学惰性） ③离子强度 加入中性盐 增加离子强度，与水结合强，便于有机溶剂提取 对于离子性特强，水溶性极大的药物，可采用离子对提取 ①原理 ②应用 阴离子：COOH+ SO3H- 反离子 四丁基铵 阳离子：NH2+ 反离子烷基或芳基磺酸盐 提取溶剂用量:一般在试管中进行 有机相与水相比1:1到5:1 ①固相选择 样品1ml 1ml规格固相 1~25ml 3ml规格固相 ②固相处理 反相C18 固定相的6~10倍体积甲醇洗柱，使溶剂化 6~10倍水缓冲服液冲洗达分离状态 ③上样 ④分离 用适当的弱溶剂洗涤 洗去杂质，通N2干燥固相 ⑤洗脱待测物 改变pH或极性 （1）流速 流速快，按触不充分，样品流失 回收率低 柱处理 5~10ml·min-1 洗脱 0.2~1ml·min-1（〈300mg〉 2~5ml·min-1（300mg） （2）装样 过载 突破性试验 已知浓度样品液 ① 小体积上柱→洗脱回收百分率 ②加大体积→洗脱回收百分率 ③绘图 当回收率下降时为过载 液相色谱技术简介 液相色谱技术简介 液相色谱技术简介 液相色谱技术简介 液相色谱技术简介 液相色谱技术简介 液相色谱技术简介 分配系数 可由Langmuir方程得出 Kd---分配系数 q、c---溶质在固相和液相中的浓度 保留时间（tR）和保留体积（VR） 反应样品在柱子中的保留或阻滞能力，是色谱过程的基本热力学参数之一。 分离度:又称分辨率，用来表示两种洗脱曲线相邻的溶质相互分离的程度。 理论板，理论板当量高度（HETP），理论塔板数（N）、 反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系。 理论板：将溶质达到一次分配平衡的色谱柱段。 理论板当量高度：该段色谱柱的高度。 理论板数的计算方法 液相色谱技术简介 种质中心Waters HPLC仪器全图 由图可以看出，HPLC仪器排出了大量的有毒废液，而这些实验室的废液是直接经下水道排到环境中去的，造成大量污染 Waters HPLC仪器分离检测单元图 由图可以看出HPLC仪器需要大量的有毒流动相 Agilent HPLC色谱仪器 Agilent HPLC仪器使用的废液瓶，这些废液并没有专门的处理方法 Waters HPLC仪器内部结构 Waters仪器内部结构，右边内部是真空脱气机，外边是比例阀，右边是泵和单向阀，管路众多，结构复杂 Waters仪器的分离通道 Waters仪器的样品分离通道，上面是色谱柱，下面是一个小的预柱 开尔文探针显微镜描述单个分子里的“电荷分布”图片 液相色谱的结构与原理 液相色谱的结构 高压输液系统 分离系统 检测系统 进样系统 液相色谱的分离系统 液相色谱的基本概念 固定相：固定相是色谱的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。 流动相：在色谱过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体等，都称为流动相。柱色谱中一般称为洗脱