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.凝胶过滤色谱GFC是一种纯粹按照溶质分子在流动相溶剂中的体积大小分离的色谱法填料具有一定范围的孔尺寸，大分子进不去而先流出色谱柱，小分子后流出。 装置示意图  酶分离纯化的方案设计 a. Sketch the elution profile expected if this mixture is run on a Sephadex G-100 gel filtration column run in 50 mM phosphate buffer, pH 6. Label the peaks. b. Sketch the gel obtained from running these proteins on an SDS polyacrylamide electrophoresis gel at pH 8.0, (after staining and destaining). c. What predictions can you make about the results of a native PAGE at pH 7.6 ( state any assumptions you might need to make about the % acrylamide in the gel ) d. Sketch the elution profile of these proteins from a carboxymethyl cellulose ion exchange chromatography column, run at pH 6.25 (with a salt gradient, if necessary). Label the peaks. * *  色谱分离法 参考生物大分子的液相色谱制备 第二版，师治贤编著，科学出版社生物工程下游技术——细胞培养、分离纯化，分析检测，刘国诠编，化学工业出版社，1993 各类色谱中溶质与固定相间的相互作用力 ■ 色析法的发展过程： 圆形滤纸 长条滤纸 薄层层析 (TLC) 管柱层析 容量变大 容量更大 加展开液 Adapted from Scope RK (1987) Protein Purification – Principles and Practice p.9 Paper partition chromatography (PPC) Martin, Synge (1952) ■ 色层分析法的基本机制： 极性相似的两分子间，其亲和力较强。 极性 → 极性 非极性 → 非极性 Like Dissolves Like L L ■ 色层分析法的基本原理： 流动相 Mobile phase 固定相 Stationary phase 样本分子依其分子极性 选择亲和两相之一 ADSORPTION PARTITION Liquid - Solid Liquid - Liquid 两相系統 A B C 每次分离样本 都要做一次选择 One Plate of Separation (理论板数) S 极 性 L 非 极 性 极 性 非 极 性 样本 样本 ■ 凝胶过滤法是一种 Partition 层析法： 样本 固 定 相 流 动 相 小分子 被阻滞 小分子 大分子 Stokes radius 分子大小、 形状 较快流出 ■ 各 种 色 析 胶体 ： Pharmacia Bio-Rad Sephadex Sepharose Sephacryl Sephacel BioGel P BioGel A glucose (dextrose) agarose glucose + acrylamide cellulose acrylamide agarose FPLC Superose, Superdex Mono Q, Mono S 传统SEC填料 粗、中、细 Sephadex葡聚糖凝胶—（瑞典 Pharmacia 公司—Amersham）  肽和球蛋白的分离范围G10 -700G15 -1500G25 1000~5000G50 1500~30000G75 3000~80000G100 4000~150000 超细4000~100000G150 5000~300000 超细5000~150000G200 5000~600000 超细5000~250000 Sephacryl 烯丙烯基葡聚糖与N、N’-亚甲基双丙烯酰胺经共聚而制备的一种共价交联的刚性珠体。S-200 5000~250,000 S300/400/500/1000Sepharose琼脂糖凝胶2B/4B/