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组培实验讲义3.doc
实验三、固体培养基的配制与灭菌及培养器械的灭菌
实验目的、要求：学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法
实验原理：组织培养所以的培养基含有植物生长所必须的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。
实验材料、试剂盒仪器设备：
1、试剂：琼脂、蔗糖、蒸馏水，0.1mol/L的NaOH和HCl溶液、各类母液
2、仪器设备：分析天平、超净工作台、烧杯、；量筒、移液管、药品勺子、称量纸、pH计、培养罐
实验内容与步骤：
一、MS培养基的配制：
1.量取及称量：根据培养基配方，按所需容量分别吸取母液，母液吸取量=需配制培养基体积/母液浓缩的倍数。如，需配1000ml培养基，则其需要大量元素母液量50毫升，其他依次类推。将母液混在1L的大烧杯中，加入蔗糖（常用量30g/L），容量瓶内加水至1L定容。
2.加入激素：根据需要加入一定量的激素：如配制NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L的培养基，则需要利用枪头吸取0.5ml，1mg/ml的NAA溶液和0.5ml，1mg/ml的6-BA溶液。
3.混合与调节pH值：将定容好的加入激素的培养基倒入大烧杯中，调节pH值，利用盐酸和氢氧化钠溶液，将培养基pH值调节至5.8-6.0范围内，边用玻璃棒搅拌边加盐酸和氢氧化钠溶液，调节好后，将溶液倒入1L的试剂瓶中，称取适量的琼脂（常用量10g/L）加入试剂瓶中，准备灭菌。
4.灭菌：封严培养容器口后，121℃灭菌30min后，待高压灭菌锅的压力为零时，将培养基取出，置于水平台子上，在室温下冷却（紫外灭菌），分装到培养罐中，备用。
二、培养皿和培养器械的灭菌
报纸包裹培养皿，将镊子、剪刀、滤纸放入不锈钢饭盒中。以及消毒瓶、无菌水等放入高压灭菌锅中，进行灭菌，灭菌完毕后放入烘箱中烘干备用。
作业：1、将自己的操作流程简要写出来，
2、在培养基制备过程中应注意哪些环节？
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