执业药师复款习资料6.ppt

第六章 色谱法 考试大纲要求 掌握薄层色谱法的基本原理、操作方法以及在药物鉴别、检查中的应用。 掌握气相和高效液相色谱法的基本原理及其在药物鉴别、检查和含量测定中的应用。 掌握气相色谱和高效液相色谱系统适用性试验的主要内容。 熟悉电泳法的基本原理和常用的电泳方法。 了解气相色谱仪和高效液相色谱仪的基本结构、毛细管电泳法的基本原理。 第六章 色谱法 色谱法(chromatography)是建立在被分离组分在两相间具有不同分配特性基础上的分析方法。 静止不动的一相称为固定相（stationary phase），参与运动的另一相称为流动相（mobile phase）。 一、分离原理 （一）分配平衡 在色谱分离过程中，当温度一定时，认为组分在两相间的分配可以达到热力学平衡，此时组分在固定相中的浓度（Cs）与在流动相中的浓度（Cm）之比为一个常数，表示为： K= Cs / Cm K为平衡常数（equilibrium constant）。当色谱体系的固定相和流动相一定时，K是反映组分保留特性的参数，K值大，表明组分与固定相的作用强，易于保留；反之，则组分与固定相的作用弱，易于进入流动相而被洗脱。由于不同组分其化学性质各异，就具有不同的保留特性或不同的K值，从而通过色谱方法得以分离。 （二）保留参数 色谱图（chromatogram）是由组分在柱中的浓度与流出时间作图形成的曲线。描述曲线特征的各种保留参数（retention parameter），反映了组分在色谱柱中的作用和分离特性。 1．保留时间 组分从进样开始到柱后该组分出现峰值浓度时，所需的时间称为保留时间（retention time，tR）。而不保留组分从进样开始到出柱时，所需的时间称为死时间（void time，t0 ）。 色 谱 图 1．保留时间：保留时间；死时间；调整保留时间。 2．容量因子：由于保留体积的大小与柱的尺寸有关，不能完全反映组分的保留特性，所以引入容量因子（capacity factor，k′）的概念。根据分配平衡定义的容量因子为：在一定温度下，组分在两相间的分配达到平衡时，其在两相中的绝对量之比。 tR = t0（k′ + 1） （三）理论塔板（theoretical plate ） 两个组分被分离的条件首先是它们有不同的K值或 k′值，但也与峰的形状和宽度有关。为了描述色谱峰的宽度，引入理论塔板数（n）的概念。 （四）范氏方程（Van Deemter equation） 1956年，Van Deemter提出了色谱中塔板高度受三方面的因素影响，并总结出了与流动相线速（u）有关的经验表达式称为范氏方程: Van Deemter方程说明了填充均匀程度、载体粒度、载气种类、载气流速、柱温、固定液层厚度对柱效的影响，对色谱条件的选择具有重要意义。 1.色谱柱的理论塔板数（n）:达到规定要求； 2.分离度(R): 除另有规定外R应大于1.5； 3. 重复性(RSD): 取对照品溶液,连续进样5次其峰面积测量值的相对标准偏差不大于2.0%； 4.拖尾因子(T): 除另有规定外，T应在0.95～1.05之间。 在给定色谱条件下，相邻的两个色谱峰被分离的程度用分离度来表示。tR1，tR2，W b1和W b2分别表示第一个和第二个色谱峰保留时间和峰宽。一般Rs 1.5，认为两峰完全基线分离。 三、各种色谱法 色谱法分类 按两相状态分: 气相色谱法 气—固色谱法 气—液色谱法 液相色谱法 液—固色谱法 液—液色谱法 （一）薄层色谱法 　薄层色谱法（thin layer chromatography，TLC）是将固定相铺于平板上，利用流动相的毛细现象推动组分迁移，由于不同组分在两相间分配特性或吸附作用的差异，而得以分离的色谱方法。与其他色谱方法相比，薄层色谱法具有操作简便、分析快速、应用广泛等特点 。 １．原理：分配系数的不同，引起差速迁移． ２．比移值： ３．色谱展开 在流动相的作用下，组分在铺有固定相的平板上进行差速迁移而逐步被分离的过程称为色谱展开。通常将铺有固定相的平板称为薄层板，将流动相称为展开剂。对展开后的薄层板，组分斑点在薄层板中的位置是其定性分析的依据，而组分斑点的面积或吸收光强度则是其定量测定的