第五章植物无性系秋的快速繁殖.pptVIP

第五章 植物无性系的快速繁殖 植物无性系的快速繁殖 分五个阶段： 第一阶段，无菌培养物的建立 （外植体的建立） 第二阶段，诱导外植体生长与分化 第三阶段，试管苗的增殖和继代培养 第四阶段，壮苗与生根 第五阶段，小植株的移栽驯化 无菌培养物的建立 植物材料的准备 源植物的预处理 植物材料的采集 植物材料的消毒 无菌操作 初代培养物 初代培养建立起来的条件 初代培养中易出现的问题及对策 源植物的预处理 为获得健康、无菌的植物材料，需要在材料采集之前进行预处理，即将源植株栽培在特殊管理的大田或温室，或进行室内盆栽 如果必须从大田中采集植物材料，则须做到 采集未休眠或绽放前带芽鳞的芽 用塑料布包裹将用的茎段或植物体部分，待长成后采集 用最幼嫩的枝条 将枝条采回后用流水冲洗。 植物材料的采集 选择植物材料应遵循的原则： 1、外植体再生能力强； 2、遗传稳定性好； 3、外植体来源丰富； 4、外植体灭菌容易。 植物材料的采集 植物材料的采集要考虑 消毒的难易程度 天气、季节、生长环境、生长状态、取材部位等 培养目的 组织培养中的反应性 即植物材料自身因素对培养中生长和发育的影响，也就是培养的难易程度 培养目的 从培养目的讲 苗木快速无性繁殖：多采用腋芽茎段、原球茎或茎尖（分生组织）作起始培养材料 生产单倍体植株：多采用花粉(药)培养或未受精胚珠培养 生产植物次生代谢物：常用活体中该天然物质含量最丰富的部位游离的细胞作起始培养材料 组织培养中的反应性 基因型 源植株年龄 组织或器官的年龄 生理状态 健康状态 取材季节 生长条件 取材位置 外植体大小 损伤 外植体的极性和接种方法 预处理 基因型 双子叶植物常比单子叶植物容易获得再生植株，而裸子植物的再生能力则非常有限 同属不同种，甚至同种不同品种，器官分化和植株再生能力也有很大的差异 源植株年龄 植物的胚性组织常具有较高的再生能力 随着植物年龄的增加，其再生能力会随之而下降 植物组织培养常选用幼龄植物的组织或器官作外植体 组织或器官的年龄 幼嫩柔软(非木质化)组织一般比年老的木质化的组织更易于组织培养 在开花期，植物的再生能力都得到提高 生理状态 外植体的生理状态显著影响着细胞分裂状态 一般而言，处于植物营养生长状态的外植体比生殖生长时具有更强的再生能力 健康状态 从健康的植株上取材，培养成功的可能性显然远远大于不健康的植株。 在为营养繁殖选取外植体时，源植株的健康状态对消毒的难易程度、培养的难易程度及再生植株的表现都有很大影响，所以要慎之又慎。 取材季节 从大田栽培或野生的植物上采集外植体时，要考虑取材时的季节因素 冬季是否严寒(严寒有利于打破休眠) 夏季是否干燥(水分供应不充足，就生长得差) 生长季节是否光照充足(光照不足，营养物质贮备较少) 生长条件 自然昼长和自然光照条件下生长的植物材料同温室中甚至试管中离体培养的植物的培养反应有所不同 与大田植物相比，生长在温室中的植物更易伸长和黄化，在培养中也更容易再生 取材位置 从树体上游分离外植体时，位置越靠上，不定根发生的可能性就越小，这是由于上部要比下部更为成熟 按照植物生理学的观点，沿植物主轴，愈向上生长时间愈短，但其生理或发育特性则愈近发育成熟，也就愈可能形成花器官；而愈靠近下部则愈近发育上的幼态，不定根发生能力也愈强 外植体大小 离体部分愈大，就愈易诱导其生长和再生，同时添加的营养和植物生长调节物质的依赖性也有所下降 分生组织越大，存活率越高，却对于脱除病毒不利，外植体愈小的旺盛生长的分生组织区域，病毒含量就越小或无，脱除病毒的机会也就越大 切取大小不同的伤口面积同无损伤部分的比例也应加以考虑，因为它会影响到再生能力 损伤 损伤组织对培养反应影响大，因为损伤区域可以扩大对营养物质和生长调节物质的吸收，同时也增加乙烯的产生 外植体的极性和接种方法 外植体的极性也显著影响着培养中的反应，极性同某些生理活性物质的浓度梯度有关 外植体的接种方式有两种：有时极性方式直立，非极性方式倒置。有时非极性接种方式根和芽再生比极性接种方式更容易，也更快 预处理 原初外植体可通过预处理来改变其生理状态 低温处理 将外植体置于一定的溶液中(含糖、BA、GA3等或不同浓度的BA) 利用注射的方法注入生长调节物质 植物材料的消毒 植物材料的消毒 植物材料的消毒 茎段、茎尖或叶柄、叶片表面消毒 地下根茎消毒 果实和种子消毒 花药或未授精胚珠等消毒 注：为了增强消毒效果，采用如下方法： 将植物材料在灭菌前用清洁的流水(或自来水)冲洗0.5—2小时 向消毒剂中加入1滴或数滴吐温(Tween)20或80，浓度为0.08％一0.12％，粘着剂可降低表面张力，更好地同材料表面接触 在