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8 .发酵工艺控制 8.1 微生物发酵类型 1. 依据投料方式:分批发酵、补料分批发酵、连续发酵； 2.依据是否需氧：好氧发酵和厌氧发酵。 一、分批发酵、补料分批发酵、连续发酵 1、分批发酵：指一次性投入料液，接种后在发酵过程中不再补入料液，一直到放罐的发酵方式。 特点 优点：操作简单，周期短，染菌几率小，在生产过程中产品质量容易掌握。 缺点：不适于测定过程动力学，对基质浓度敏感的微生物，产率比较低。 2、补料分批发酵:也称为补料分批培养(fed-batch culture FBC)是指在分批培养过程中间歇或连续的补加一种或多种成分的新鲜料液的培养方法，又称为半连续发酵。 补入时间：一般在生长期后，以维持生产期的稳定。 补料方式很多：连续流加、不连续流加、多周期流加等。 3.连续发酵 连续培养就是进入产物合成期后，开始以恒定的流速向发酵关内流加培养基，同时以相同的速度放出培养液，使发酵罐内的体积、菌体浓度、产物浓度保持恒定。 特点 优点：产率高、生产稳定，便于实现自动化控制。 缺点：增加染菌几率，易造成菌种的退化。 8.2 发酵过程的代谢变化 一、初级代谢产物发酵的代谢变化 发酵过程中菌体的生长过程表现出：延迟期、对数生长期、静止期和死亡期等生长使特征。没有明显的产物合成期。 二、次级代谢产物发酵的代谢变化 发酵过程中的代谢变化一般分为：菌体生长期、产物合成期、菌体自溶期。 1、菌体生长阶段 主要的代谢活动为：碳源和氮源等营养物质的分解代谢和菌体生长的合成代谢。 2、产物合成阶段 主要的代谢主要是：碳源和氮源等营养物质的分解代谢和产物的合成代谢。 3、菌体自溶阶段 菌体衰老，细胞开始自溶，氨氮含量增加，pH上升。 8. 3参数及检测 1.参数 常规的控制参数有：罐温、 pH、溶氧、搅拌转数、空气流量、罐压、液位、基质浓度、产物浓度等。 2.检测方法 在线检测：温度、pH、溶氧、搅拌、压力等。 离位检测：基质浓度（残糖浓度）、产物浓度、菌体浓度等。 8.4营养基质的影响及控制 一、营养基质种类的影响及控制 1.碳源 碳源种类的影响：速效碳源有利于菌体的快速生长，但其分解产物有明显的阻遏作用；缓慢利用的碳源有利于延长代谢产物的合成。 碳源浓度的影响：碳源丰富易造成繁殖过剩，对产物合成及氧的传递造成不良的影响。 在工业上的控制，一般采用二者混合使用，并控制一定的浓度，在发酵过程中采用补料分批发酵的方法。 2.氮源 影响：同样包括种类和浓度的影响。 工业生产中采用的措施： 1）混合使用 2）在发酵过程中补加氮源。 3.磷酸盐 在工业生产中，通过在基础培养基中控制磷酸盐的亚适量，来减少磷酸盐的抑制作用。 二、基质浓度对发酵的影响及控制 1.影响： 基质浓度过低，不能满足菌体生长的需求； 基质浓度过丰富，也会影响菌体生长和产物的合成。 2.控制： 一般根据菌种的特性，通过补料维持在菌体半饥饿状态。 8.5 种子质量的影响及控制 1.接种菌龄 影响：年轻的种子，到发酵罐后生长缓慢， 生长期延长，发酵周期延长；过老的 种子，长表现过早衰老。 控制：控制在菌体浓度接近高峰时移种，在 对数生长期后期。 2.接种量 影响：接种量少迟滞期延长；过大会造成 溶氧不足，影响菌丝和产物的合成。 控制：根据菌种的生长繁殖速度及对溶氧 的要求确定接种量。 8.6温度的影响和控制 一、影响 1、温度对微生物生长的影响; 2、温度对产物合成的影响; 3、温度对产物合成方向的影响； 4、温度对发酵液物理性质及氧的溶解度、 传递的影响。 二、影响发酵温度的因素 发酵热是引起温度变化的主要因素。 发酵热：即发酵过程中释放出的净热量单位J/(m3.h)，用Q发酵表示。 Q发酵= Q生物+Q搅拌-Q蒸发-Q显热-Q辐射 种子罐热交换系统多用于加热，发酵罐多用于冷却。 三、最适温度的选择和发酵温度的控制 选择最适温度应考虑两个方面：微生物的最适生长温度和产物合成的最适温度。 控制：一般采取变温控制，同时在控制时注意灵活掌握。 如溶氧条件差，补料不及时，培养基利用缓慢生长缓慢时，都要及时调整。 8.7 pH的影响及控制 一、影响 1、作用胞外弱酸或弱碱成为分子形式，进入细胞后影响胞内酶蛋白的解离度和电荷状态，改变酶的结构和功能，从而影响微生物的生长和产物合成。 2、影响细胞的形态； 3、对代谢产物产生影响。 二、发酵过程中pH变化规律 1）大多数微生物生长适应