第17章木高效液相色谱.pptVIP

第十七章 高效液相色谱法 §17-1 概述 §17-2 高效液相色谱仪 §17-3 液-固色谱法 §17-4 液-液色谱法 §17-5 离子交换色谱法 §17-6 空间排阻色谱法 §17-7 液相色谱分离类型的选择 试题 §17-1 概述 1.高压： 对载液施加15～30MPa，甚至高达50MPa的高压。 2.高速： 载液流速可达1～10mL·min-1，一般都小于1h。 3.高效： 可达5000～30000塔板/米。 4.高灵敏度： 采用高灵敏度检测器，最小检测限可达10-11 g。 §17-3 高效液相色谱仪 2. 高压输液泵： 选用流速恒定、压力平稳、无脉冲、流量可调节的高压泵输送载液。压力：150～350×105 Pa。 §17-4 吸附色谱法 液-固色谱以固体吸附剂为固定相，在其表面具有活性的吸附中心，如硅胶、氧化铝等。 流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。 根据各组分在固定相上吸附能力的不同进行分离。 §17-5 分配色谱法 液-液分配色谱两相都是液体。 早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相,现多为化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。 流动相与固定相互不相溶，两者之间有一个明显的分界面。 由于试样中各组分在两相中的分配系数的差异，使各组分在两相间进行分配。 §17-6 离子交换色谱法 离子交换色谱的固定相为离子交换树脂，树脂上具有可交换的离子基团。 流动相为无机酸或无机碱的水溶液。 各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。 §17-7 空间排阻色谱法 空间排阻色谱的分离机理不是根据试样组分与固定相之间的相互作用，而是依据试样分子的尺寸大小进行分离的。 空间排阻色谱以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径的多聚体的通称。 §17-7 液相色谱分离类型的选择 1.对于异构体：液-固吸附色谱法； 2.对于同系物：液-液分配色谱法。 M.W. tR 1.软质凝胶：由某些高聚物制成，如葡萄糖凝胶、琼脂糖等。 2.半硬质凝胶： 聚苯乙烯凝胶等。 3.硬质凝胶：多孔硅胶、多孔玻珠等。 二、空间排阻色谱固定相 三、空间排阻色谱流动相 不与试样或固定相之间相互作用，仅起载液作用。 空间排阻色谱以凝胶为固定相，分为三类： 一、相对分子质量 1.相对分子质量低：气相色谱法； 2.相对分子质量大：空间排阻色谱法。 二、溶解度 1.能溶于水并离解：离子交换色谱法； 2.能溶于烃类：液-固色谱法。 三、化学结构 * * 一、高效液相色谱法的特点 适用于有机及生化试样的高效分离分析方法。 高效液相色谱流程示意图 1. 分析对象不同： 气相色谱法的分析对象是在柱温下具有足够的挥发性和热稳定性的物质，因此只限于分析气体和沸点较低的化合物及相对分子质量小于400的非离子型化合物； 高效液相色谱法对试样的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，能分析相对分子质量大于400的有机化合物。 二、高效液相色谱与气相色谱的比较 气相色谱的流动相是惰性的载气，不参与分配过程，它与组分分子没有亲合作用，仅起运载的作用； 液相色谱中的流动相（载液）对组分分子有一定的亲合作用，与固定相争夺组分分子，因而增大了分离的选择性。 2.流动相不同： 3.固定相不同： 气相色谱的固定相填料粒度比较粗，常用柱填料目数为60～140目，其颗粒直径为100～250μm，柱效为2000～3000塔板/m，柱长一般为1～3m； 高效液相色谱中的柱填料粒度比较细，一般为3～10μm，形状多为球形，柱效为3 x 104～8 x 104塔板/m，柱长一般为0.05～0.5m。 （1）液相色谱在室温下操作，较低柱温有利于分离； （2）组分在载液中的扩散系数比在载气中小105倍。 （3）载液粘度比载气粘度大102倍，必须采用高入口压。 4.操作条件的差异： 载液和载气性质不同而造成的差异： 均有吸附色谱和分配色谱，不同的是液相色谱法还可以根据离子交换作用或分子尺寸大小的差异而进行离子交换色谱和空间排阻色谱分离。 5.分离机理的异同点： 一、高压输液系统 1. 贮液器：用来贮存流动相，由玻璃、不锈钢等制成。 进样系统包括进样口、注射器和进样阀