有机磷诱导拟南芥差异蛋白表达及其对酯酶同功酶活性的抑制-生物通.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（７）：４３４８ 有机磷诱导拟南芥差异蛋白表达及其对酯酶 同功酶活性的抑制 １ １ ２ １ １ ３ １ １ 丛靖宇 　高仙灵 　朱　宏 　万东莉 　李国婧 　张　镝 　杜　红 　王瑞刚 （１内蒙古农业大学生命科学学院　呼和浩特　０１００１８　２哈尔滨师范大学生命科学学院　哈尔滨　１５００８０） （３内蒙古农牧科学院分析测试中心　 呼和浩特　０１００００） 摘要　研究植物响应Ｏｐｓ的分子机理对于建立有机磷生物修复技术具有重大的理论意义和实践 价值。以拟南芥为例，研究了有机磷胁迫下酯酶同功酶及其可溶性总蛋白的响应。结果表明，有 机磷明显抑制了植物的生长发育，并可通过根部吸收的方式迅速进入拟南芥体内，通过抑制酯酶 同功酶活性对植物造成胁迫。同时，发现在拟南芥体内存在 １个有机磷诱导下的差异表达蛋白， 该蛋白与１，５二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶（ＲｕＢｉｓＣＯ）大亚基高度同源。 关键词　拟南芥　有机磷　酯酶同功酶　差异表达蛋白　可溶性总蛋白 中图分类号　Ｘ５ 　　有机磷农药（ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ，ＯＰｓ）作为 １　材料与方法 高效、广谱杀虫剂在农业生产中有着广泛应用。然而， ＯＰｓ在为农业生产提供了高效杀虫性能的同时，也带来 １．１　材　料 ［１２］ 　　植物材料：野生型 Ｃｏｌｕｍｂｉａ生态型拟南芥 了严重的负面影响 。随着人类生活质量的提高和 环保意识的增强，ＯＰｓ的残留和毒害问题已引起人们的 （Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ）。 普遍关注，并成为关系人类健康和经济发展的重大科 　　有机磷试剂：市售１５％甲基对硫磷乳油。 技问题。由于植物是Ｏｐｓ的直接施用对象，因此，研究 １．２　植物培养 植物响应Ｏｐｓ的分子机理对于建立有机磷生物修复技 １．２．１　种子处理　用７０％乙醇和含０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０ 术具有重大的理论意义和实践价值。 的无水乙醇分别对种子灭菌 １０ｍｉｎ，在 １．５ｍｌ无菌 ＥＰ 　　研究表明，酯酶同功酶是动物的有机磷作用靶 管中，加入１ｍｌ无菌水，４℃春化３天。 ［３］ １．２．２　拌毒蛭石培养　取３份蛭石，每份０．３７ｋｇ。将 酶 ，而植物的有机磷作用靶酶尚不清楚。通过研究 有机磷胁迫下拟南芥酯酶同功酶及其可溶性总蛋白的 甲基对硫磷乳油稀释 １００倍，分别吸取０ｍｌ、２．５ｍｌ和 响应，试图阐明植物酯酶同功酶与有机磷胁迫的关系， １２．５ｍｌ，用等量蒸馏水补足体积，拌毒，使有机磷浓度 明确除酯酶同功酶以外，在植物体内还存在与有机磷 分别为０ｇ／ｋｇ、０．０１ｇ／ｋｇ和０．０５ｇ／ｋｇ。每处理均分三 胁迫有关的其他分子，从而为阐明植物耐受有机磷的 份，作为三个重复。分别接种２０粒春化３天的拟南芥 分子机理和建立有机磷植物修复途径提供依据。 种子。 １．２．３　有机磷灌根处理　在装满蛭石的培养钵中接 种６粒春化３天的拟南芥种子，置于２５℃、１２ｈ光照／ １２ｈ黑暗的条件下，培养２周后，保留２个壮苗作为试 收稿日期：２０１００１２６　　修回日期：２０１００３１６ 验材料。为减少蒸发造成的误差，用保鲜膜封闭培养 内蒙古自然科学基金（２００５０