实验三 死活细胞的鉴别.pptVIP

实验三 死活细胞的鉴别 1.实验目的 2.实验原理 3.试剂与器材 4.操作方法 5.注意事项 6.作业与思考 一、实验目的 1.学习并掌握死活细胞鉴别的原理及方法。 2.能够辨别死、活细胞。 二 实验原理 死活细胞鉴别有许多不同的方法，其中最常用方法是台盼蓝染色排除法。 其原理是：许多酸性染料不容易穿过活细胞的质膜进入胞内，却能渗入死亡的细胞内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。 荧光排除法 活细胞具有较强的酯酶活性，可将二丙酸酯荧光素中的荧光素分解出来，从而使细胞发出强烈的黄绿色荧光，死亡细胞由于酯酶失活，不能分解二丙酸酯荧光素，不能发出荧光。 三、试剂与器材 1.材料：血细胞 2.试剂：0.4％台盼蓝溶液（生理盐水配制）、PBS。 3.器材：显微镜、血细胞计数板、载玻片、滴管等。 四、实验内容 1.血细胞悬液的制备 取一定量的新鲜血液加入20等份的PBS。 2.染色制片 取0.5ml细胞悬液放入干净试管中，加入1—2滴台盼蓝染液，混合，2min后制成临时装片，镜检。 3.结果 死细胞染成蓝色，活细胞不着色。 细胞计数：单位视野内死细胞个数、活细胞个数。 细胞活力公式 根据下式求细胞活力： 活细胞率（％）＝（细胞总数-死细胞数）/细胞总数?100％ 五、注意事项 1.计数时应多选择几个视野，以多个视野内的平均值作为细胞的存活率。 2.以台盼蓝排除法在倒置显微镜下计数死活细胞数目需注意染色时间。 六、作 业与思考 1.计数死活细胞数，计算出细胞存活率。 2.为什么台盼蓝作用一段时间后，细胞的存活率会变低？ * * 染色排除法：染成蓝色的为死细胞 *