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花卉组织培养 BIOX.CN 2006-7-14 13:13:09 来源：生命经纬 花卉组织培养条件 早期的花卉组培报道，多集中于研究各类花卉的培养基组成，包 括无机盐、有机物、激索等培养基成分的种类和配比浓度。近几年来 随着越来越多培养基研究成果的积累，人们的研究逐渐深入到培养条 件方面，如培养温度、光照强度、容器内空气因素对花卉组培和培养 过程中植物生长速度、生长质量的彩响。 温度：温度对离体条件下花卉的形态发生、器管生长有着直接的 关系，随着研究的深入，研究者发现温度对组培成败起决定作用。据 陆文梁报道：风信子雄蕊再生最适温度为25°C,母细胞分化温度为 18?20°C,小抱子和花粉发育在温度边续下降屮完成。花粉第一次有 丝分裂温度为10°C,否则其不发育。 光照：近年來的研究发现，除光照强度外，光照质量对花卉组培 也有较大影响，据倪德祥等在香石竹的研究表明，白光条件下生长量 最高，其次是红、黄、绿、蓝光对生长有抑制作用，单色光对叶绿素 合成有抑制作用，叶绿素的合成需要在复合光条件下完成。 空气：肖玉兰等在非洲菊上的研究表明，采用透气性封口膜进行 培养时，植株的干重、生根率、叶面积、健壮程度均好于无透气性的 封口膜。在培养瓶屮增加CO2浓度时，植株生根率、健壮度高于不 增加C02浓度的对照。 1 实验室要求 花卉组织培养是在人工控制的条件下培养花卉，是一种花卉现代 工厂化生产新技术，所以其对实验室及设备有一定的要求。 实验室方面 化学实验室：主要承担配制培养基的任务。要求具有各种化学 药品试剂、各种玻璃器皿、称量天平等。 洗涤室：主要进行玻璃器皿的洗涤，要求有自来水装置，同时 有烘箱，以便洗后烘干。 灭菌室：主要进行培养基和用具的消毒。要有高压灭菌锅，具 有水源和电源。 接种室：是花卉材料分离、消毒接种和转移的场所。要求密闭、 清洁、整齐、装有紫外灯，能随时灭菌。有的也可用接种箱或超净工 作台代替。 培养室：是花卉材料培养生长的地方。耍求清洁，保温好，室温均 匀一致，并有绝热、防火性能。 1 设备要求 天平：供配制培养基时称量药品和激素用。大量元素用普通天 平；微量元素和激素用分析天平。 酸度计：测定培养基的pH用。 高压灭菌锅：是供培养基和器械用具灭菌用。 烘箱：洗净的玻璃器皿干燥灭菌用。 蒸憎水制造装置：得到纯净水供培养用。 冰箱：供贮放母液和植物材料用。 接种箱或超净工作台：为植物材料接种或转移的操作场所。 空调机：控制室温用。 1 试管苗玻璃化 自从Phillys和Mathews等报道了石竹茎尖培养吋出现试管苗玻 璃化现象，有关花卉组培过程中，发生试管苗玻璃化现象的报道较多, 特别是对香石竹、丝石竹试管苗玻璃化进行了比较深入的研究。从冃 前的研究报道來看，对玻璃化发纶机理还缺乏真正的了解。 玻璃苗和正常试管苗在形态和生理生化上的差异成为研究的重 点，大多数研究者希望通过研究两者在各方面的差异，來解释玻璃化 现象发生的机理和控制方法。在形态解剖特征上玻璃苗表现为半透明 状，茎尖顶端分生细胞较小，结构简单缺少维管束原组织，茎叶细胞 体积膨大，液泡化程度高，肥质稀薄，细胞核变小，细胞无明显长轴 等现象；在生理生化特征上，玻璃苗的细胞过度含水，还原糖、蔗糖、 K、Ca和CL离了含量明显高，而木质素、叶绿素、蛋口质、肌醇、 Fe和Cu的含量则明显低。Kevers和Gaspar报道石竹组培中，玻璃 化组织的乙烯产生总是高于正常组织。通过众多的研究发现影响玻璃 化发生的因素有材料差异、培养基水势、环境温度、碳源供应状况、 无机盐和离子浓度等方面。目前各研究者在控制试管苗玻璃化方血提 出了一些具体的措施，这些措施包括增加光照强度，提高琼脂浓度至 0.8%、同时事先去除琼脂屮的杂质，降低培养容器屮的相对温度， 使用透气性的封口膜，降低培养基屮NH4 +浓度,增加培养瓶中C02 浓度，止确调配培养基中激素比例。 1 培养基 培养基是花卉植物组织培养中十分重要的基质，目前应用的有好 多种，但其主要成分大体相同，主要成分是水，其他还有大量元素、 微量元素、维生素、生长调节物质、蔗糖和琼脂等。 目前花卉组织培养中应用最多的为MS培养基。其组成是在配制 1升（1000毫升）培养基时，加硝酸鞍1.65克、硝酸钾1.9克、氯化 钙0.44克、硫酸镁0.37克、磷酸二氢钾0.17克、碘化钾0.83毫克、 硼酸5.2毫克、硫酸镁22.3毫克、硫酸锌3.6毫克、钮酸钠0.25毫克、 硫酸铜0.025毫克、氯化钻0.025毫克、硫酸铁27.8毫克、蔗糖30 克和琼脂7克。其他生长调节物质要根据花卉的种类和培养目的而确 定。MS培养基中大量元素浓度过高，为此常采用1/2、1/4人量元素 浓度作培养用，这样生长效果列好。 配制培养基前要准备好三角瓶、试管