草鱼鱼鳞酶溶性胶原蛋白的提取及基本特性-水产科学.PDFVIP

第26卷第2期 水 产 科 学 v01．26N。．2 2QQ2生!旦 兰!曼坚量型量璺 璺鱼!垦塑鱼堡!：尘：!堂 草鱼鱼鳞酶溶性胶原蛋白的提取及基本特性 钟朝辉，李春美，顾海峰，窦宏亮 (华中农业大学食品科技学院，湖北武汉430070) 摘要：利用胃蛋白酶从草鱼鱼鳞中提取酶溶性胶原蛋白(PSC)。并用氨基酸自动分析仪、sDs— PAGE电泳、Dsc、Fr—IR和圆二色谱对草鱼鱼鳞胶原蛋白的氨基酸组成、相对分子量、变性温度和结 构进行了研究。试验结果表明：所提草鱼鱼鳞蛋白为典型的I型胶原蛋白；且至少含有2条o【链，q。和 0【：链；Dsc分析表明其变性温度为37．1℃。 关键词：草鱼鱼鳞；胶原蛋白；提取；特性 中图分类号：S912 文献标识码：A 文章编号：1003—1111【2007)02D091讲 近年来由于疯牛病、口蹄疫等疾病的流行，以 1．2方法 牛、猪等陆生动物皮为原料提取的胶原蛋白其安全 1．2．1草鱼鱼鳞胶原蛋白的提取及纯化 性受到了怀疑，世界各国都将其目光转向从水产品 由于胶原蛋白容易变性，试验操作均在lO℃ 中提取胶原蛋白的研究。目前国内外对鱼类胶原 下进行。鱼鳞加水用微波中火加热2min，磁力搅 蛋白的研究已取得了较大进展，但对从鱼鳞废弃物 拌30min去杂。去杂后的鱼鳞置于20倍体积的盐 中提取胶原蛋白的研究国内外报道较少¨引，大都 酸中，磁力搅拌24h除钙，蒸馏水洗至中性。置lO 局限于海洋鱼类鱼鳞。关于淡水鱼草鱼鱼鳞胶原 倍体积的0．8％的柠檬酸溶液(含1％的胃蛋白 h，将溶出物经纱布过滤后，离心， 蛋白，仅刘庆慧心J、KimuraS等呤1对其提取、类型及 酶)，磁力搅拌48 肽链组成进行了初步的研究。 残渣重复上述操作2次，3次上清液合并，加0．9 moL／L moL／L乙 我国淡水鱼产量丰富，2002年淡水养殖鱼的产 NaCl盐析过夜后离心，沉淀用0．5 7 酸溶解[1圳，重复上述盐析和溶解操作1次，胶原蛋 量约1．7×10t，其中鱼鳞废弃物占1％一5％。鱼 鳞含有丰富的胶原蛋白，长期以来被作为废物抛 白液移入透析袋，蒸馏水透析3d，每天更换透析水 弃，这不仅造成了资源的巨大浪费，同时也污染环 2～3次。冷冻干燥后备用。 境。为了更好地促进淡水鱼加工废弃物的综合利 1．2．2SDS—PAGE凝胶电泳 用，开发新型胶原蛋白资源。笔者以柠檬酸为提取 采用sDs—PAGE垂直电泳，7．5％的分离胶； 液，利用胃蛋白酶从淡水鱼鱼鳞中提取酶溶性胶原 5％的浓缩胶；电泳缓冲液为Tris一甘氨酸缓冲液 moL／L 蛋白，在此基础上利用现代生物技术对草鱼鱼鳞胶 (pH8．3，含0．1％sDs)；样品缓冲液为o．05 原蛋白的氨基酸组成、相对分子量、变性温度和结 Tris—Hcl缓冲液(pH8．O，含2％SDs、5％p—ME、 构进行了研究，以期为草鱼鱼鳞胶原蛋白在医药、 10％甘油和O．02％的溴酚兰)；0．25％的考马斯亮 保健、食品加工、化妆品等众多领域的广泛开发利 兰R一250甲醇水染色液；酸甲醇水脱色液(7．5％ 用提供参考。