利用抑制差减杂交技术分离三角褐指藻在缺氮条件下-中国科学院水生.PDF

篷 HEREDITAS(Beijing)2009年8月，31(8)：865--870 ISSN0253-9772 WWW．chinagene．ca 研究报告 DoI：10．3724／SP．J．1005．2009．00865 利用抑制差减杂交技术分离三角褐指藻在缺氮条件下 上调表达的基因 唐建新 ，陈卓 ，胡晗华 1．中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术 国家重点实验室，武汉 430072 2．中国科学院研究生院，北京 100049 摘要：为了阐明硅藻利用氮源的分子机制，以三角褐指藻为材料，利用抑制差减杂交技术，分离鉴定了16个在 缺氮诱导条件下上调表达 的基 因片段。其 中，与已知功能基 因具有较高相似性的有 7种，都是跟氮源的吸收利 用相关的。Northernblotting验证其中5个基因，包括硝酸盐转运蛋白基因、铁氧化还原蛋白亚硝酸还原酶基 因、 铵盐转运蛋 白基因、结合ATP盒的转运蛋白基 因和嘌呤透过酶基 因，在缺氮诱导条件下转录水平有明显上调。 关键词：三角褐指藻；抑制性差减杂交；缺氮 Separationoftheup-regulatedgenesundernitrogen starvationfrom Phaeodactylum tricornutum bysuppression subtractivehybridization technology TANG Jian—Xin ，一，CHEN Zhuo ，一，HU Han—Hua 1StateKeyLaboratoryofFreshwaterEcologyandBiotechnology，InstituteofHydrobiology，ChineseAcademyofSciences，Wuhan 430072，China； 2．GraduateSchooloffPChineseAcademyofSciences．Belling100049．China Abstract：SixteencDNA fragmentsofPhaeodactylum tricornutumwereisolatedandidentifiedtobeuD—regulatedunder nitrogenstarvationbysuppressionsubtractivehybridization(SSH)technologyinordertoelucidatethemolecularmecha— nism ofthediatom nitrogenutilization．Sevenofthem havehighsimilaritywiththefunctionalgenesrelatedtotheutiliza— tionofnitrogen．Northernblottinganalysisindicatedthat5genes，nitratetransportergene rt)，nitritereductasegene ir)， ammonium rtansportergene(amt)，ATP-bindingcassettetransportergene(abc)，andpurinepermeasegene up)，were significantlyup—regulatedunderni~ogenstarvation． Keywords：Phaeodactylum tricornutum；suppressionsubtractivehybridization；nitrogenstarvation 氮源是控制海洋浮游植物生长 的一个重要 因 初级生产力[21，硅藻具有一系列高亲和力的与氮源 素 ”。氮源的利用包括氮源的吸收、储存 、还原和 转运相关的蛋白[，，可以有效的利用多种形式的氮 氨基酸的合成等过程。其 中，氮源的吸收可由特异 源 ， 。液泡 占据硅藻细胞体积的 40％，可储存氮 的氮源转运相关的蛋 白来完成。作为海洋 中重要的 源们。真核微藻硝酸盐的还原经历了以下过程：首先 收稿 日期：2009—02—13；修 回日期：2009—05—25 基金项 目：中国科学院知识创新工程重要方 向性项 目(编号 ：KSCX2一Yw—G-060)资助 作者简介：唐建新(1982一)，女，硕士研究生，研究方向