抗人fc阳εriα fab.docx

研究生优秀毕业论文 上海交通大学博士学位论文上海交通大学 上海交通大学博士学位论文 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立 进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意 识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 私寝 ， 日期：沙岱年厂月7日 万方数据 上海交通大学 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同 意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许 论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或 部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存和汇编本学位论文。 保密口，在一年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 ， 不保密窗。 (请在以上方框内打“4’’) 学位论文作者签名： 鹚暇 指导教师签名： 日期：沙f5年，月寸E1 日期：勘t阵厂月乎日 万方数据 上海交通大学博士学位论文抗人FccRIa 上海交通大学博士学位论文 抗人FccRIa Fab．聚合物胶束．雷公藤红素诱导 肥大细胞凋亡治疗过敏性疾病 摘要 研究目的：构建偶联抗人FceRIot Fab包裹雷公藤红素的聚合物胶束 (抗人Fce．Rlct Fab．聚合物胶束．雷公藤红素三聚物)，分析其对肥大细胞 的靶向性、增殖抑制及促凋亡作用，探讨其在过敏性哮喘小鼠体内的分 布及对哮喘和被动皮肤过敏反应的抑制效果。 研究方法：①采用薄膜水化法制备雷公藤红素．聚合物胶束，EDC偶 联法构建抗人FceRItx Fab．聚合物胶束．雷公藤红素三聚物，采用粒度分析 仪、透射电子显微镜分别观察胶束的粒径和形态，反相．高效液相色谱法 测定其包封率和载药量。②体外以人外周血嗜碱性白血病细胞KU812(表 面高表达Fc8RI，靶细胞)和人未成熟肥大细胞HMC．1(表面几乎不表 达FceRI，非靶细胞)为研究对象，以香豆素6为探针，采用流式细胞仪 和激光共聚焦显微镜检测三聚物的靶向作用；CCK一8法测定细胞增殖抑 制率，Annexin V-FITC／PI双标记合并流式细胞仪定量分析凋亡细胞比率， 酶法和免疫印迹分别检测凋亡分子caspase 3活性和切割的PARP表达水 平，分析三聚物对肥大细胞增殖抑制及凋亡作用。⑧以卵清蛋白免疫 万方数据 上海交通大学博士学位论文BABL／c小鼠建立哮喘模型，以近红外荧光素DiR为探针，观察三聚物 上海交通大学博士学位论文 BABL／c小鼠建立哮喘模型，以近红外荧光素DiR为探针，观察三聚物 在过敏性哮喘小鼠体内的分布及其对肺组织的靶向性；给予三聚物干预 治疗，ELISA法检测血清OVA特异性IgE(OVA-slgE)和肺泡灌洗液 (BALF)组胺的水平，采用Luminex技术测定BALF中Thl／Th2细胞 因子的含量，计数BALF白细胞总数及嗜酸性粒细胞数，观察肺组织炎 症情况，分析三聚物对过敏性哮喘的治疗效果。此外，通过皮内注射 IgE．DNP和尾静脉注射DNP-HSA诱导小鼠被动皮肤过敏反应，给予三 聚物干预治疗，观察伊文氏蓝扩散程度，验证三聚物对过敏反应的抑制 作用。 研究结果：①制备了抗人FceRIot Fab．聚合物胶束．雷公藤红素三聚 物，包封率为98．9-t：3．3％，载药量为22．8+1．O％，粒径在93．43nm左右， 分布均匀，呈短棒状或椭圆状。②流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测 结果显示抗人FceRIot Fab．聚合物胶束进入靶细胞的量显著高于未偶联抗 体的胶束；细胞增殖和凋亡的结果表明抗人FceRIot Fab-聚合物胶束．雷公 藤红素三聚物作用组的肥大细胞抑制率、凋亡细胞比例、caspase 3活性 和切割的PARP水平均显著高于单纯的雷公藤红素和雷公藤红素．聚合物 胶束组。⑨体内研究结果表明，三聚物能促进药物在过敏性哮喘小鼠的 肺组织聚集，并有效地减少哮喘小鼠血清OVA-slgE、BALF组胺和Th2 细胞因子(IL．4、IL．5、IL．13和TNF．仅)的合成，增加抗炎因子IL．10 的分泌，降低BALF白细胞和嗜酸性粒细胞数量，减轻肺组织炎细胞浸 万方数据 上海交通大学博士学位论文润和黏液分泌：此外三聚物能有效减少伊文氏蓝的渗出，降低血管通透 上海交通大学博士学位论文 润和黏液分泌：此外三聚物能有效减少伊文氏蓝的渗出，降低血管通透 性，减轻小鼠被动皮肤过敏反应。且三聚物的抗过敏效果明显比单纯的 雷公藤红素和雷公藤红素．聚合物胶束组更强。 研究结论：成功构建了抗入FceRIa Fab．聚合物胶束