穗花杉中不存在紫杉醇的化学及分子生物学证据.PDF

西北植物学报 ，2016，36(4)：0661—0666 ActaBot．Borea1．-Occident．Sin． 文章编号 ：1000—4025(2016)04—0661-06 doi：10．7606／j．issn．1000—4025．2016．04．0661 穗花杉中不存在紫杉醇的化学及分子生物学证据 王 帅 ，邵芬娟 ，李 论 ，芦 强 ，邱德有 (1_中国林业科学研究院林业研 究所 ，北京 100091；2．广西桂林小庐山生态农业发展有限公司 ，广西桂林 541205) 摘 要 ：穗花杉(Amef0t口z“snrg0taenia(Hance)Pilger)是红豆杉科穗花杉属 的一个种 。由于穗花杉与红豆杉属 植物具有较近 的亲缘关系，有研究者认为穗花杉也可 以合成紫杉醇，并利用 HPLC法测到其含有紫杉醇 。但这仅 仅是依靠 HPLC中出峰时间来判断，并没有质谱结果 。该研究利用 LC—MS对穗花杉茎叶的化学提取物分析结果 显示 ，穗花杉的茎叶中均未发现紫杉醇 。为了进一步证明穗花杉不能合成紫杉醇，该研究利用欧洲红豆杉 (Taxus baccataL．)紫杉醇生物合成关键基因一紫杉二烯合成酶基因(Taxadienesynthasegene，TbTS)的序列 TBLASTN 比对穗花杉本地转录组，从 中找出并克隆得到与 TbTS同源性最高的A。r丁SL1基因；利用原核表达分析AarTSL1 基因的编码蛋 白，结果发现该基因不具有紫杉二烯合成酶编码基 因的功能。该研究从化学和生物学两个方面均证 明穗花杉无法合成紫杉醇，为以后通过植物学和化学分类学等研究穗花杉的分类学地位提供了新的有用信息。 关键词 ：穗花杉 ；紫杉醇 ；紫杉二烯合成酶 ；LC-MS；原核表达 中图分类号：Q785；Q789 文献标志码 ： ChemicalandMolecularBiologicalEvidenceRevealsThatThereIsNo TaxolinAmentotaxusargotaenia (Hance)Pilger WANG Shuai，SHAO Fenjuan ，LILun ，LU Qiang，QIU Deyou (1．TheResearchInstituteofForestry，ChineseAcademyofForestry，Beijing100091China；2．GuangxiGuilinXiaolushanEeo— logicalAgricultureCo．Lit，Guilin，Guangxi541205，China；) Abstract：A7P t0t以z sargotaenia (Hance)PilgerisonememberofAmentotaxusinTaxaceae．Duetothe c1osegeneticrelationship betweenA ．argotaenia and Taxus sp．，someresearchersthoughtthattaxol couldbesvnthesizedinA ．argotaeniaandtestifiedthishypothesisusingHPLCmethod．Thisconclusion was ustreachedbasedontheretentiontimeofthepeakintheextractO A ．argotaeniacorrespondingto thatofthetaxolstandard，butnotfrom anymassspectradata．Inthisstudy，weanalyzedtheextractmnof thestemsandleavesofA ．argotaeniawithLC—MS，andfoundthattherewasnotaxolintheextractmn．In ordertoDroveourhypothesis，AarTSL1genewasisolatedandclonedbyusingthetaxadienesynthaseof Tn．z 5bacca。toTBLASTN thetranscriptomeofA．argotaenia．FunctionalanalysisofAarTSL1