研究生课淡程病毒.pptVIP

λ噬菌体 λ噬菌体的生活周期 λ噬菌体的基因组 λ噬菌体的复制 λ噬菌体基因的转录和调控 λ噬菌体溶源途径与裂解途径的调节 四、基因的转录与调控 前早期转录 晚期转录 λ噬菌体赖以发展作为基因克隆载体: 非必要基因由外源基因取代所形成的重组噬菌体DNA，可以随着寄主大肠杆菌细胞一道复制和增殖，而且在其溶源周期中，它们的DNA是整合在大肠杆菌的染色体DNA上，成为后者的一个组成部分。 反转录过程中DNA双链的合成和LTR的产生 反转录病毒的反转录过程（一） 反转录酶以病毒基因组RNA的5’为模板，以tRNA为引物，合成cDNA (大约100-200个核苷酸) 在反转录酶到达基因组5‘末端时，该酶的RNaseH活性切除了刚才拷贝过的RNA模板 新产生的U5R DNA序列中的R与基因组3末端的R序列相结合，产生了新的模板-引物搭配，即第一次跳跃 DNA从3‘末端延伸，产生出全部的RNA基因组互补链 大多数RNA被RNaseH切除，只留下U3序列左边的一小段RNA 反转录病毒的反转录（二） 以该小段RNA为引物，合成出第二条DNA链(正链DNA)的U3,R,U5和PBS部分 RNaseH将RNA和tRNA切除掉 正链上的PBS序列与负链上的PBS序列互补，产生了第二次跳跃 两条DNA链分别从3末端继续合成DNA，最后产生出具有长末端重复序列LTR的双链线性DNA 病毒线性DNA整合到寄主细胞基因组 在细胞质中合成线性的原病毒DNA以后，DNA进入细胞核。在细胞核内，除了线性DNA，病毒DNA还以环状形式存在。 体外实验证明，线性DNA可以整合到染色体基因组上，此过程可以被单一病毒产物整合酶所催化。病毒DNA的末端是很重要的，正如转座子一样，在末端的突变会阻止整合。 ? 原病毒的基因表达 1、病毒基因的转录 原病毒DNA的转录就像大部分其他真核细胞的转录一样，也需要启动子和增强子。 2、转录后加工 原病毒DNA转录合成的初转录本是从同一帽子位点起始的，因此所有的反转录病毒RNA基因组和大多数mRNA都有相同的5’端，并且在5’端形成帽子结构(m7GpppGmp)。 3、病毒mRNA的翻译 全长的mRNA转运到细胞质后被翻译时，所得产物为Gag和Pol多聚蛋白。当翻译开始于起始密码子而终止于第一个终止密码子时所得产物为Gag蛋白。如果要表达Pol蛋白，则必须要越过此终止密码子。 反转录病毒的翻译（一） 病毒外壳蛋白 蛋白酶 反转录酶 整和酶 反转录病毒的翻译过程（二） 外膜糖蛋白 * 一、λ噬菌体的生活周期 分子量为31X106dal，温和噬菌体 已经定位的基因有61个 必要基因 非必要基因 二、λ噬菌体的基因组 Lambda噬菌体的遗传图谱 λ噬菌体基因组的结构 粘性末端 寄主细胞内环化 COS位点 5 3 3 5 12个核苷酸 12个核苷酸 环化状态下,λ噬菌体DNA分子的长度为48,502碱基对 例如，头部、尾部、复制及重组四大功能的基因，各自聚集成四个特殊的基因簇。 5 3 AWBCD….J..att..int..xis N O P S R 左侧区 中间区 右侧区 噬菌体头部蛋白质合成基因 尾部蛋白质合成基因 复制基因O和P 重组基因 删除和整合作用的基因 调节基因除了N和Q之外( 抗终止因子)， 还有cⅡ、cro、cⅠ、cⅢ四个基因 溶菌基因 ?三、λ噬菌体DNA的复制 λ噬菌体DNA以两种状态存在， １、是在成熟的噬菌体颗粒中包装的DNA，呈线状，具有感染性 ２、是感染宿主细胞后立即环化，成为营养体状态 O蛋白以二聚体形式结合在4个oriC重复序列上此区域DNA呈现环状 B,P结合进环状结构 B P J,K,E使P释放,B作为解旋酶开始解开双链 P B P B SSB蛋白结合在单链DNA上,引物酶G组装到DNA上,合成RNA引物指导DNA的复制 λ滚环复制的晚期 A B C …J int cIII N cI cro cII O P Q S R P1 tL2 tL1 PL PR tR1 tR2 PR 3 1 1 2 2 主要启动子及转录终止位点 1-前早期转录;2-后早期转录;3-晚期转录 后早期转录 五、λ噬菌体溶源途径与裂解途径的调节 λ噬菌体的Cro蛋白和CI阻遏蛋白相互拮抗： Cro蛋白阻止cI 转