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为什么用紫外法可以测定Tyr、Phe、Trp的含量？ 2．用阳离子交换柱分离氨基酸，在pH=2时，碱性氨基酸和酸性氨 解：Tyr、Phe、Trp是含有共轭双键的氨基酸，其溶液在近紫外区 基酸相比，哪一个先被洗脱？为什么？ 9 有光吸收，吸收峰在280 nm。 解：酸性氨基酸先于碱性氨基酸被洗脱。 根据Lambert-Beer定律(A=εc ι)，一个样品的吸光值A与浓度c 阳离子交换柱层析是一种用阳离子交换树脂作支持剂的层析法。 为线性关系。 1 阳离子交换树脂上含有的酸性或弱酸性基团可以解离出氢离子，与 1 已知比色杯光径ι=1cm，并且这三种氨基酸有自己特定的摩尔消光 2 溶液中的阳离子发生交换。 1 系数ε，因此，如果测出光吸收度A，便可求出浓度c。 在pH=2时，氨基酸的羧基不发生解离，而氨基会发生质子化， 第 因此氨基酸主要以阳离子形式存在。 一 碱性氨基酸带有两个氨基、一个羧基；酸性氨基酸带有两个羧基，一个 章 氨基。 发生质子化后，碱性氨基酸所带正电荷明显多于酸性氨基酸。 氨基酸与树脂的亲和力主要取决于它们之间的静电吸引，因此，碱 性氨基酸与树脂上的阳离子发生交换而被“挂”在树脂上机会多，结合 力强；相反，酸性氨基酸则结合力弱。 因此当用缓冲液 洗脱氨基酸时，酸性氨基酸将先于碱性氨基酸被洗出。 蛋白质的水解产物是什么？ 10 组氨酸各基团的pK值分别为：羧基为1.8(pK1)．氨基为9.3(pK2)， 解：蛋白质是由氨基酸残基靠肽键连接起来的，其完全水解产物是 侧链为6 （pKR）。 氨基酸。 赖氨酸各基团的pK值分别为：羧基为2.2(pK1)．氨基为9.l(pK2)， 实际上，蛋白质水解方法不同，所得到的水解产物是有区别的： 侧链为10.5(pKR)。 1 蛋白质经酸水解 （如6mol/L HCl，煮沸20h），产生的氨基酸为 1 请分析这两种氨基酸中哪种更适合作为细胞的缓冲剂？为什么？ 3 L-氨基酸，但色氨酸被破坏，羟基氨基酸部分分解，酰胺类氨基酸的 4 解：组氨酸。 酰胺基团也会遭到破坏。 因为赖氨酸的pK1、pK2和pKR都远离生理pH，这三个基因在生理 蛋白质经碱水解（如5 mol/L NaOH，煮沸10 h）后的产物中，除 pH下都处于带电状态（α羧基带负电、α氨基和侧链均带正电），不 色氨酸稳定外，大多数氨基酸被不同程度破坏。 具备缓冲能力。 蛋白质的蛋白酶水解往往是不完全水解，产物是不同大小的肽段。 而组氨酸，虽然其pK1、pK2远离pH 7，但pKR为6，因此在生理 不同蛋白酶水解位点专一性不同，对同一种蛋白质水解产生的肽段 pH下，咪唑基几乎有一半为质子化的，一半没有质子化。 大小也不同。 此时它既能从环境中获取质子，又能释放出质子，因而更适合作为