快速及慢速冻存对小鼠骨髓造血细胞功能影响的比较研究.pdf

维普资讯 杭州大学学报 (自然科学柱)。第23卷 ，第1期 ，1996年 1月 JournalofI-I~ngzhouUniversity (NaturalScience) Vo1．23,No．1, January, 快速 慢 冻存对小鼠骨髓造血 一 细胞功能影响的比较研究 ． J，R 星登 型皇塾：葛云法 郑斯涌 (生命科学学院) 髓胞细一一一让 R了f 摘 要 广 本文采用快速和慢速两种不同跨存方法深低温保存小鼠骨髓细胞，在冻存 1、10、20和30,：1，复 苏后检铡细胞的功能变化 ，并比较两种不同方法冻存对细胞的影响．实验结果表明；快速冻存 3od， 细胞的回收率、存活率和膜完整性与冻存前比较分别为 71．74士847 、78．61±7．54 和 65．34~ 4．20 ．受 8OGyc0一 射线照射的同种小鼠，移植冻存一复温骨髓细胞后 ，造血干细胞 (CFU— s)的回收率为新鲜对照组 的72．41±602 受体小鼠的骨髓有核细胞数 、白细胞数和脾细胞数 回 升显著 ，30天的存活率为44 ．上述各项指标与慢速冻存组 比较均无显著性差异 (P 005)．提 示快速冻存仍能保持造血干细胞的一定活力 关键词迢 术； 低温保存 嘶 汨 中图分类号 ：Q462 骨髓细胞 (BMC)的深低温保存为临床骨髓移植治疗联合免疫缺陷病 、严重再生障碍 性贫血、自血病和放射线引起的重度遣血障碍等提供了一项有效措施．快速冻存技术是近 年来发展迅速的深低温保存生物材料的方法之一．具有在快速降温和复温过程中避免细 胞 内外冰晶形成对细胞的损伤 ，方法简便，不需降温设备等优点．已成功地冻存了早期动 物胚胎…、大鼠卵母细胞 、人胰岛细胞等 ．至今．骨髓细胞的深低温保存大多采用常规 慢速降温方法…．快速冻存 尚未见报道 。我们采用不同的冻存液．比较了快速和慢速冻存 方法对骨髓细胞活力及造血重建能力的影响， 评价 冻存细胞的冻存质量及探讨冷冻机 弹 ． 1 材料与方法 1．1 骨髓细胞悬液制备 BALB／C纯系雄性小 鼠，体重 18—22g(浙江实验动物 中心提供)，颈椎脱位法处死 - 国家和潮江省 自然科学基金资助项 目 本文 1994年 1月 22日收到 维普资讯 第 1期 胡军棒等 ：快速和慢速冻存对小鼠骨髓造血细胞功能影响的比较研究 53 取股骨 ，用 RPMI1640液 (Sigma产品)冲出骨髓细胞，通过 4号针头 ，再用 100目铜 网过 滤，450g离心 15min．去除血浆及大部分红细胞，保留骨髓有 核细胞 (BNC)．悬浮于含 20IU／ml肝素的 1640液 内．调节细胞数至 2×10个 ／m1． 1．2 冻存与复温 快速冻存 冻存液含有 18．5 W ／VDMSO(二 甲基亚砜)、14．O0／oW ／V 乙酰胺 、9． O W ／V丙二醇和 4．1％W ／V聚L--醇 (分子量6．000)．按 Rall和Fahy的方法分三步