两种双壳贝类和光棘球海胆上微卫星标记的分离及特性分析.docxVIP

独创声 独创声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他入已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含未获得 《篷!翅逡查墓缝遂噩 楚别岂塑鲤：奎拦要窒2或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的 同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名彦矗晶签字圈期：棚艿年石月7墨 学位论文版权使用授权书 、本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家 有关部门或机构送交论文的复印彳孛和磁盘，允许论文被查阕和借阅。本人授权学校可以 将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等 复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到 《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文 在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：给晶晶 导师签字： 签字日期：鼬晒年占月7 Et 签字日期： 年 月 E1 两种双壳贝类和光棘球海胆微卫星标记的分离及特性研究两种双壳贝类和光棘球海胆微卫星标记的分离及特性研究 两种双壳贝类和光棘球海胆微卫星标记的分离及特性研究 两种双壳贝类和光棘球海胆微卫星标记的分离及特性研究 摘要 本研究利用磁珠杂交筛选和数据库检索两种方法开发了西施舌 (Coelomactra antiquata)、魁蚶(Scapharca broughtonii)和光棘球海胆 (Strongylocentrotua nudus)三种重要无脊椎动物的微卫星DNA标记。 西旌舌和魁蚶是我国重要的经济贝类，但是由于近年来过度开采、环境退化， 其产量迅速减少。为了研究其遗传多样性和种群结构，制定合理有效的保护措施， 本文利用磁珠杂交筛选法首次开发了西施舌和魁蚶的多态性微卫星标记。首先， 采用常规苯酚氯仿法从闭壳肌中提取基因组DNA，经限制性内切酶Sau3AI酶切 后，选取300．1000 bp大小的片段，用人工设计合成的生物素标记的寡核苷酸重 复序列(CA)。。作为探针与经过酶切后的基因组DNA进行杂交，杂交复合物固定 到包被有链亲和素的磁珠上，经过一系列的洗涤过程，获得含有微卫星序列的 DNA片段。再经过克隆和测序，根据SSR两端的保守区进一步用引物设计软件 Primel；Premier 5．0设计引物，开发多态性微卫星DNA标记，并利用40野生个体 检测其多态性。在西施舌分离的9个微卫星位点，其等位基因数为2．28，期望杂 合度为0．083．0．921=在魁蚶分离的12个微卫星位点，其等位基因数为2．22，期 望杂合度在0．444．0．944。 近年来国际公共数据库中表达序列标签(ESTS)呈指数增长，为遗传分析提 供了丰富资源。本文利用生物信息学的方法，从美洲紫海胆(Spurpuratus)EST 库中首次筛选出9对光棘球海胆EST-SSR。首先，用SSRHunter软件查找美洲紫 海胆EST库中含有微卫星片段的DNA序列，选取其中的40条序列用Primer Premier 5．0在重复序列两端合适的位置上设计微卫星引物。合成的引物在光棘 球海胆扩增，扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，筛选特异性强、等位基因丰 富的位点。本论文筛选出的9个光棘球海胆EST-SSR位点的等位基因数为2．13， 观察杂合度和期望杂合度分别在0．000．0．645和0．063．0．912。 关键词：西施舌：魁蚶；光棘球海胆；微卫星；磁珠杂交选择；EST-SSR 两种双壳贝类和光棘球海胆微卫星标记的分离及特性研硝Isolation 两种双壳贝类和光棘球海胆微卫星标记的分离及特性研硝 Isolation and characterization of microsatellite markers in two species of bivalve and sea urchin Strongylocentrotus nudus Abstract The microsatellite DNA markers of the xishishe clam·Coelomactra an哟uate，the ark shell Scapharca broughtonii and the sea urchin Strongylocentrotus nudus have been isolated by magnetic selective hybridization and data mining of expressed sequence tags(ESTs)in this study． The xishishe clam C．ann