NY/T 569-2002马传染性贫血病琼脂凝胶免疫扩散试验方法.pdf

11.220 BIC4S1 中华 人 民共 和 国农 业 行 业标 准 NY/T569--2002 马传染性贫血病琼脂凝胶免疫扩散 试 验 方 法 Agargelimmunodiffusiontestforequineinfectiousanemia 2002一08一27发布 2002门2一01实施 中华人 民共和 国农业部 发 布 气47 NY/T569-2002 前 言 马传染性贫血病(equineinfectiousanemia,简称EIA)是马属动物以反复发作、贫血和持续病毒血 症为特征的传染性疾病，被世界动物卫生组织仁WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeIn- ternationaldesEpizooties(法).OIE〕列为I3类疫病，我国农业部列为二类动物疫病。 本病是由反转录病毒科、慢病毒属的马传贫病毒(ELAV)引起的，经吸血昆虫传播。 本标准规定的琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID)诊断方法，是根据OIE((诊断试验和疫苗标准手册》 (2000年版)和我国实际情况制定的，技术上一致。该法简便特异，在国际贸易中为指定的诊断方法。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。 本标准主要起草人:相文华、沈荣显。 NY/r569-2002 马传染性贫血病琼脂凝胶免疫扩散 试 验 方 法 范围 本标准规定了马传染性贫血病的琼脂凝胶免疫扩散技术要求。 本标准适用于马传染性贫血病的诊断和检疫。 2 琼脂凝胶免疫扩散试验 2门 材料准备 2.1.1 抗原:检测用抗原按说明书使用。 2.1.2 血清: a) 检验用标准阳性血清 能与合格抗原在12h内产生明显致密沉淀线的传贫马血清，做8倍以 上的稀释仍保持阳性反应者为宜。小量分装，冻结保存。 b 被检血清:不含防腐剂和抗凝剂的被检马血清。 2.1.3 pl-I7.20.01mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)，配制方法见附录A(规范性附录)。 2.2 操作方法 2.2.1 制备琼脂板 2.2.1.1取优质琼脂1.0g，直接放人含有万分之一硫柳汞的100m工的PBS中，用热水浴溶化混匀。 2.2.1.2 将直径90mm的平皿放在水平台上，每平皿倒人热溶化琼脂液 15ml一18nil，厚度约 2.smm左右，注意不要产生气泡，冷凝后加盖，把平皿倒置，防止水分蒸发，放在普通冰箱中可保存两周 左右 根据受检血清样品多少亦可采用大、中、小三种不同规格的玻璃板。10cmX16cm的玻璃板加注热 琼脂液40ml,;6cmX7cm的加注11mL;3.2cmX7.6cm的加注6MI 配成的琼脂液，可装瓶中用胶塞盖好，以防水分蒸发，待使用时，现溶化现制板。 2.2.2 打孔 反应孔现用现打。在坐标纸上画好七孔型图案。把坐标纸放在带有琼脂板的平皿或玻璃板下面，照 图案在固定位置上用金属管打孔，将切下的琼脂片取出，勿使琼脂膜与玻璃面离动。抗原孔及外周孔孔 径均为5mm，孔间距3mm(见图1) 0 0 O 0 O O