薄层色谱鉴别介绍.pptVIP

D2薄层板 有资料表明，60%以上的薄层分离用硅胶作为吸附剂，其次为纤维素、氧化铝、聚酰胺、硅藻土等。 固定相 硅胶 硅胶是一种弱酸性的多孔性无定形吸附剂。 硅胶表面有很多硅醇基(－Si－OH)，通过硅原子上的-OH基团与极性化合物或不饱和化合物形成氢键而表现出吸附性能。硅醇基的数目越大，则吸附能力增强。 硅胶也能吸附水分而成为水合硅醇基。 氧化铝 氧化铝由氢氧化铝高温脱水而成。按制备方法不同，氧化铝可分为三种： 碱性氧化铝：pH = 9～10,可分离合成染料，生物碱等 酸性氧化铝：pH = 4～5，适应于酸性物质的分离 中性氧化铝：pH = 7～7.5，适于分离醛酮，以及对酸碱 不稳定的脂和内酯等化合物 氧化铝的活度与其含水量有关，含水量大，则吸附能力小。 活性级别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 含水量% - 3 6 10 15 纤维素 纤维素分子中带有许多羟基，亲水性 强，分离原理与纸色谱相似，但分离效果 和分离速度均比纸色谱佳，可以代替纸色 谱. 普通纤维素：天然纤维素、高纯度纤维素、微晶纤维素。 乙酰化纤维素：用乙酸将纤维素结构上的 羟基酯化而成，适用于反相色谱。 离子交换纤维素：纤维素经化学反应，使 分子中一部分羟基上的氢被阳离子或 阴离子交换基取代而成，具有离子交换树 脂的性质。 纤维素的种类有： 聚酰胺 聚酰胺是由酰胺聚合而成的高分子聚合物。薄层色谱中常用的聚己内酰胺，结构如下： 酰胺中心的酰胺基可与酚类、酸类、硝基类等 化合物形成氢键而对这些物质产生吸附作用。 应用：蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离。 [-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C-N-]n H O 葡聚糖 葡聚糖是一种由葡萄糖残基构成的多糖物质。 葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖悬浮于有机相中，加入交联剂交联聚合而成。 在葡聚糖分子上引入有机基团，则可成为亲脂性凝胶。 在葡聚糖凝胶上引入羧甲基、磺乙基等，则制成具有离子交换性质的葡聚糖凝胶离子交换剂。 应用：蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离 薄层板的种类 载板材料：玻璃片、铝箔、塑料片等 薄层板类型： 硬板：在固定相中加入粘合剂（煅石膏、淀粉）; 软板：不加粘合剂; 烧结玻璃板：将玻璃粉与硅胶、氧化铝等吸附 剂按一定比例混合后，以丙酮、乙醇或水等溶剂 调成匀浆，涂成薄层，经高温烧结而成。 吸附剂及预制板包装上的符号及含义 G——加入一定的煅石膏作粘合剂 H——不加粘合剂，供制各种软板用 F254——加入对254nm波长能发荧光的物质 F254s——加入抗酸性荧光指示剂 E 温度的影响 温度影响物质的分配系数KD，同时也影响纤维的水合作用，改变固定相的量。 F 展距的影响 薄层色谱法---跑板 点样???? 用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端2cm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样（用电吹风的热风吹干再点），以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干。底线距基线1～2．5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应， 2.展开???? 将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。 展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂，密封室顶的盖。 展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管， 薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。 展开应密闭，展距一般为8～15cm。薄层板放入展开室时，展开剂不能没过样点。一般情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过0.5cm。 展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用。（展开缸中得展开剂弃去，密封在容量瓶中得展开剂可在当天使用） 展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。 Rf值一般控制在0.3～0.8