温度pH和金属离子对仿刺参蛋白酶活力影响的研究.PDF

研究报告　REPORTS 温度、pH 和金属离子对仿刺参蛋白酶活力影响的研究 1 1,3 1 1 2 王吉桥 ，唐 黎 ，许 重 ，程骏驰 ，王年斌 （1. 大连水产学院 生命科学与技术学院，辽宁 大连 116023 ；2. 辽宁省海洋水产科学研究院，辽宁省应用海 洋生物技术开放性实验室，辽宁 大连 116023 ；3. 贵州大学 动物科学学院, 贵州 贵阳 550025 ） 摘要：利用分光光度计比色法测定了温度、pH 值和Hg2+等9 种金属离子对体长24.2 cm±0.7 cm 仿刺参(Apostichopus japonicus)消化道中蛋白酶活性的影响。结果表明，蛋白酶的最适温 度为40 ℃，对热不稳定，最适pH 为7.2。Hg2+ ，Mn2+ ，Ag+ ，Pb2+ ，Ba2+ ，Ca2+对蛋白酶的 活性有抑制作用，抑制作用由强至弱依次为Hg2+ ＞Ag+ ＞Mn2+ ＞Pb2+ ＞Ca2+ ＞Ba2+ ，其中Hg2+ + 2+ 2+ 2+ 和Ag 与对照差异极显著(P ﹤0.01) ，表现出极强的抑制作用；Cu ，Zn ，Mg 则对酶活有 一定的促进作用，其促进作用大小依次为 Mg2+ ＞Zn2+ ＞Cu2+ ，Mg2+ 与对照差异显著(P ﹤ 0.05)。 关键词：仿刺参 （Apostichopus japonicus ）；蛋白酶；温度；pH 值；金属离子 中图分类号：Q48 ；Q55 文献标识码：A 文章编号：1000-3096(2007)11-0014-05 大规模养殖仿刺参急需开发出科学合理的人工 剂均为国产 AR 试剂；采用 721 型光栅分光光度计、 饲料。了解仿刺参的营养需求和消化酶的动力学是配 美国 Beckman 公司的大容量高速冷冻离心机和数字 制人工饲料的理论基础。国内外有关水产动物消化酶 控温式水浴锅。 的研究很多，对水产无脊椎动物消化酶的研究也取得 1.2 方法 了一定的进展[1~8] ，但对于仿刺参消化生理方面的研 正常饲养的仿刺参停食 72 h，尽量使其排空消化 究尚未见报道。为此，作者在实验室研究了温度、pH 道内的食物残渣，称体质量，测体长，于冰盘内注射 值和 Hg2+等 9 种金属离子对体长 24.2 cm ±0.7 cm 仿 0.35 mol/L KCl 溶液，诱导排脏，获得消化道，剔除 刺参消化道中蛋白酶活性的影响，以探讨仿刺参的消 与消化道末端相连的呼吸树，用冰冻重蒸水配置的 化生理，为科学配制仿刺参人工饲料提供基础理论依 pH 值 7.0 磷酸盐缓冲溶液（Na HPO -KH PO ）冲洗， 2 4 2 4 据。 在称量瓶中摇匀后称质量，置于冰箱中暂存备用。 1 材料与方法 酶液的制取：在冰浴中用玻璃研磨器匀浆样品，每1 g 样品研磨 10~15 min，按 1.0 g 样品 10.0 mL 缓冲溶 1.1 材料 液的比例分次加入 pH 值 7.00 的磷酸缓冲溶液。然后 实验用仿刺参共 16 个，体长