notch信号通路在人胚胎干细胞分化为毛细胞的无基质细胞诱导体系中的研究细胞生物学专业论文.docxVIP

浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝婆盘生或其他教育机构的学位或 证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文 中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：巧汤 签字日期： 2015年12月10 13 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝婆太堂有权保留并向国家有关部门或机 构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权迸望盘堂 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 导师签名： 签字13期：2015年12月10日 签字13期：2015年12月10日 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 致谢 致谢 时光飞逝，岁月如梭。三年的博士求学生活即将结束。在浙大学习、生活的 三年时间里，我收益良多。在即将毕业之际，我要向所有支持、关心、帮助过我 的人们表示最诚挚的谢意! 首先感谢我的导师王金福教授在这三年期间给予我的所有指导和帮助。是王 老师将我领进了干细胞研究领域。从课题的最初选择，到实验过程中难关的度过 以及最后成果的总结和论文的撰写都离不开王老师的悉心指导和督促。王老师严 谨的治学态度、渊博的知识、创新的思维给我留下了深刻的印象，并将使我受益 终身。除去科研，王老师更是用自己高尚的人格言传身教，教会我为人处事的道 理。再次感谢王老师这三年来对我的悉心培养和教育。 感谢各位论文评审老师的细心评阅，以及提出的宝贵意见。 其次，我要衷心感谢唐子华、陈加荣、张翠、陈建玲、王翠翠、李亮、柳全 文和陈键在实验上和精神上对我的帮助与鼓励。谢谢大家一起创造的和谐温馨的 实验室氛围，与大家一起的日子永远值得怀念。 最后，要特别感谢我的父母和爱人，是你们的无私奉献和精神鼓励使我顺利 完成了这三年学业! 衷心感谢所有关心和帮助过我的人们! 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 摘 要 摘要 听力损失是严重影响人类生活质量的世界性顽疾之一，目前尚无根治的方 法。虽然听力损伤对生命不造成威胁，但耳聋发病率日益增加严重影响患者的生 活质量和社会交流能力，给全球的经济发展带来了严重的影响。内耳是一个具有 复杂结构且高度特化的感觉器官。内耳毛细胞是内耳中重要的听觉感受器。在人 的内耳中，毛细胞容易受到年龄、耳毒性药物、家族遗传疾病、传染性疾病和噪 音等因素影响而损伤。内耳毛细胞为终末分化细胞，基本上不具有再生修复能力， 由毛细胞损伤引起的感音神经性耳聋往往是不可逆的，造成永久性的耳聋，目前 尚无有效的方法从根本上治愈耳聋。因此，对耳聋相关的机制研究和干预治疗迫 在眉睫。近几年来，干细胞工程的兴起为感音神经性耳聋的治疗提供了一种新思 路。以干细胞诱导分化为基础，利用干细胞相关技术，探讨听觉系统损伤修复特 别是毛细胞的损伤和再生已成为可能，有望从根本上解决听力损伤问题。 胚胎干细胞是内耳毛细胞再生的重要种子细胞之一。研究证明胚胎干细胞在 体外培养条件下仍具有多分化潜能，在合适的诱导条件下可以分化为毛细胞。但 是在胚胎干细胞及毛细胞的相关研究中依旧存在很多问题。主要包括：1、需要 建立一个简便、高效的将人胚胎干细胞体外诱导分化为内耳祖细胞的体系。2、 人胚胎干细胞体外成功分化为毛细胞的诱导体系主要建立在基质细胞共培养的 基础上，与基质细胞共培养会对再生毛细胞的后续检测和进一步研究造成一定的 干扰。3、Notch信号通路在哺乳动物内耳毛细胞的发育过程中起着非常重要的 作用，然而，Notch信号通路毛细胞体外诱导分化过程中是否具有类似的作用? 还未可知。因此，本研究的前两部分内容(即第二章和第三章)主要研究如何在 在无基质细胞作为饲养层的前提条件下，成功将人胚胎干细胞分化为具有典型静 纤毛束和电生理反应的成熟毛细胞。第三部分(第四章)，以人胚胎干细胞向毛 细胞样细胞体外定向分化的无基质细胞诱导体系为基础，进而研究Notch信号通 路中的配体和受体对毛细胞体外诱导分化的影响。 第一部分：本研究分别采取了拟胚体组合因子诱导法与单层贴壁诱导法将人 胚胎细胞向内耳祖细胞诱导分化，均获得了能够表达内耳前体细胞标志基因和蛋 白的内耳祖细胞。这两种诱导方法相比，拟胚体悬浮培养法需要分阶段操作，且 Ⅱ 万方数据 浙江大学博士学位论文