家蚕c型凝集素11bmctl11的表达特征及功能初探论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 独创性声明学位论文题目：塞蚕￡：型趟篡盍呈呈f曼坐￡!L!呈2煎塞达挂堑丞边熊 独创性声明 学位论文题目：塞蚕￡：型趟篡盍呈呈f曼坐￡!L!呈2煎塞达挂堑丞边熊 初拯 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了 特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁 在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者：形务子磊 签字日期：压体年占月肛日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院(筹)可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：日尔保密， 口保密期限至 年 月止) 学位论文作者签名：／套子枢 导师签名：栅蟾 签字日期：彳口压年6月Ⅸ日 签字日期： 加r厂年多月心日 万方数据 目 目 录 目 录 摘要 ．I Al玉STRACT ．．V 第一章文献综述 1 1．1昆虫的免疫应答及模式识别受体 1 1．1．1免疫应答概述 ．1 1．1．2昆虫的模式识别分子／受体 4 1．2家蚕中C型凝集素的研究进展 8 第二章引言 9 2．1研究背景 9 2．2研究目的及意义 9 2．3主要研究内容 9 2．4技术路线 ．．1 0 第三章Bm CTLll的序列特征及转录分析 11 3．1材料与方法 ．．11 3．1．1实验材料 11 3．1．2工具软件 1 1 3．1．3实验试剂 1 1 3．1．4主要试剂的配制 12 3．1．5主要仪器 1 3 3．1．6主要实验方法 14 3．2结果与分析 ．．19 3．2．1 BmCTLll的序列特征分析 19 3．2．2 BmCTLll的转录分析 20 3．3结论与讨论 ．．23 第四章BmCTLll的克隆表达及多克隆抗体的制备 。25 4．1材料与方法 ．．25 4．1．1实验动物 25 4．1．2载体及菌株 25 4．1．3主要药品、试剂及配方 25 4．1．4主要实验仪器 28 万方数据 西南大学硕士学位论文4．1。5实验方法 西南大学硕士学位论文 4．1。5实验方法 29 4．2结果与分析 ．．34 4．2．1 BmCTLll的克隆表达 34 4．2．2 BmCTLl 1融合蛋白纯化 36 4．2．3多克隆抗体的制备及效价的测定 36 4．2．4 BmCTLl 1的组织分布 37 4．3结论与讨论 ．．37 第五章BmCTLll的功能初探 39 5．1材料与方法 ．．39 5．1．1生物材料 39 5．1．2主要仪器 ．39 5．1．3实验试剂及主要配方 39 5．1．4主要实验方法 40 5．2结果与分析 ．．43 5．2．1结合实验 43 5．2．2微生物凝集实验 46 5．2．3体外血细胞的包被与黑化 46 5．2．4 BmCTLll对酚氧化物酶原的激活 47 5．3结论与讨论 ．．48 第六章综合与结论 49 6．1 BmCTLl 1信息分析 ．49 6．2 BmCTLll的转录谱分析 ．．49 6．3 BmCTLl 1的克隆表达及其抗体制备 ．49 6．4 BmCTLl 1的功能初探 ．49 参考文献 5 1 在读期间发表的论文及参研课题 59 附录 。61 致{射 。67 万方数据 摘要家蚕C．型凝集素11(BmCTLll)的表达特 摘要 家蚕C．型凝集素11(BmCTLll)的表达特 征及功能初探 摘要 昆虫是地球生态系统中一类具有重要地位的生物，已经报道的大约有100多万 种。作为无脊椎动物，昆虫缺少高等动物的适应性免疫，然而经过长期的自然进 化，它们已然形成了一套高效快速的防御体系用于防御外界微生物或病原生物的 侵染。在微生物表面存在保守度较高的病原相关分子模式(pathogen—associated molecule pattems，PAMPs)，无脊椎动物利用体内含有的模式识别受体(pattern recognition receptors，PRRS)能够识别病原生物的PAMPs，从而辨别病原启动进一 步的免疫。 家蚕是重要的经济昆虫，同时也是重要的鳞翅目模式昆虫，与大多数无脊椎动 物一样，其体内有多种免疫识别分子／受体，其中一类称为C．型凝集素。本论文利 用家蚕为实验材料，研究家蚕体内的一类C．型凝集素。通过本实验室前期的研究 工作，即家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)诱导家蚕全基因组转录应答分析显示， 家蚕C一型凝集素11基因(B聊C儿11)在感染中后期持续高量表达，因此，