斑马鱼毒效联合评价法在抗骨质疏松中药研究中的应用中药学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 课题来源江苏省自然科学基金资助项目(BBK201 课题来源 江苏省自然科学基金资助项目(BBK201 1866) 江苏省六大人才高峰(2013-YY006) 2014年度江苏省第四期“333工程”科研资助项目(BRA2014348) 万方数据 江苏大学硕士学位论文摘要 江苏大学硕士学位论文 摘要 本研究在课题组前期成功建立斑马鱼骨质疏松模型的基础上，进一步联合斑 马鱼毒性模型，即成斑马鱼毒／效联合评价法，并将其用于骨碎补配伍代表壮骨 药如淫羊藿、续断和代表活血药如丹参、三七的安全性和壮骨活性，以期为兼顾 有效性与安全性的抗骨质疏松中药高效评价提供思路与方法。此外，本研究应用 斑马鱼模型高效追踪壮骨关节丸的抗骨质疏松活性药味。 1．用斑马鱼毒／效联合评价法研究骨碎补配伍壮骨或活血中药的规律 (1)斑马鱼毒性模型评价药味／组分配伍前后的安全性 斑马鱼毒性模型主要观察给药后3天的斑马鱼鱼体形态和显微检视结果，并 记录给药后每天的胚胎死亡数目，计算给药后6天的药物对斑马鱼胚胎的半数致 死浓度(LC50)。斑马鱼毒性模型成功评价了代表壮骨类中药骨碎补、淫羊藿、续 断和代表活血类中药丹参、三七及其有效组分的毒性大小，并比较了骨碎补与淫 羊藿、骨碎补与丹参、淫羊藿与丹参不同配伍比例的安全性大小。 单味药提取物安全性大小顺序(以LC50值比较)为：骨碎补50％醇提物 (6826pg／mL)淫羊藿70％醇提物(1275．251ag／mL)丹参水提物(875．43肛g／mL) 三七水提物(135．86／．tg／mL)续断水提物(14．227粒g／mL)。 单味药的组分安全性大小顺序为：骨碎补总黄酮(545．4pg／mL)丹参总酚酸 提取物(37．3 J_tg／mL)淫羊藿总黄酮(35pg／mL三七总皂苷(1299／mL)丹参 酮提取物(5．3t．tg／mL)续断总皂苷(1．61．tg／mL)。 选取毒性较小的药味依照临床用量比例进行配伍，发现骨碎补50％醇提物与 淫羊藿70％醇提物及骨碎补50％醇提物与丹参水提物配伍过程中，随着骨碎补 50％醇提物在配伍中的含量增多，其安全性随之增高，但当其含量达到一定比例 时，安全性最高，继续增加其比例，安全性反而降低。 毒性较小的药味有效成分配伍，骨碎补总黄酮与淫羊藿总黄酮及骨碎补总黄 酮与丹参总酚酸提取物配伍，结果表明有效组分配伍同样使骨碎补总黄酮的 LC50值降低，毒性增强。 (2)斑马鱼骨质疏松模型评价药味／组分配伍前后的有效性 选取毒性较小的药物进行抗骨质疏松活性研究的配伍，按照前期课题组斑马 鱼骨质疏松模型的步骤，以斑马鱼头骨茜素红染色面积和累计光密度为指标，通 万方数据 斑马鱼毒／效联合评价法在抗骨质疏松中药研宄中的应用过显微检视图像计算各药物配伍前后抗骨质疏松活性的起效浓度。 斑马鱼毒／效联合评价法在抗骨质疏松中药研宄中的应用 过显微检视图像计算各药物配伍前后抗骨质疏松活性的起效浓度。 斑马鱼骨质疏松模型同样成功评价了上述各药物及有效组分的抗骨质疏松 活性，并筛选了骨碎补50％醇提物与淫羊藿70％醇提物生药比为4：4和5：4的比 例配伍活性最好；骨碎补50％醇提物与丹参水提物生药比为1：1时配伍起效剂量 最低；淫羊藿50％醇提物与丹参水提物生药比为2：1和3：1时配伍效果较优。在 有效组分配伍中，壮骨类成分淫羊藿总黄酮和活血类成分丹参总酚酸提取物与骨 碎补总黄酮配伍能够降低骨碎补总黄酮起效的浓度，减少骨碎补总黄酮用量，起 到了协同增效的功用。 2．斑马鱼骨质疏松模型筛选壮骨关节丸中主要药味的抗骨质疏松活性 用斑马鱼毒／效联合评价法筛选壮骨关节丸中各药昧的毒性与抗骨质疏松活 性，依照上述步骤进行。各药味的安全性实验由课题组其余人员进行，本研究主 要负责主要药味的药效活性筛选部分，结果显示中成药壮骨关节丸的组成药味 中，补骨脂水提物、淫羊藿水提物、续断水提物、骨碎补水提物、狗脊水提物、 熟地黄水提物和鸡血藤水提物能够对抗泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松；桑寄生 水提物、木香水提物、乳香／没药水提物、独活水提物不能够对抗泼尼松龙诱导 的斑马鱼骨质疏松。 斑马鱼毒／效联合评价法能够成功实现中药及复方有效性与安全性统一的抗 骨质疏松中药高效筛选。 关键词：斑马鱼；骨碎补；淫羊藿；丹参；毒性；骨质疏松；活性筛选；壮 骨关节丸 万方数据 江苏大学硕士学位论文 江苏大学硕士学位论文 ABSTRACT Our previous study has established the zebrafish model of osteoporosis successfutly，this study further jointed zebrafish toxi