tnni3k基因过表达诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化及机制研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

中国医学科学院北京协和医学院 中国医学科学院北京协和医学院 硕士学位论文 研究结果 研究结果表明，mESC表面蛋白分子SSEA-1和Oct-4表达呈阳性(绿色荧光)， ALP高表达呈蓝紫色，H．E染色核质比l。正常自分化的心肌细胞相关基因和蛋 白表达呈现时空特性；分化16 d时细胞免疫荧光显示MLC2、cTnI、cTnT以及 a．agtinin在胞浆高表达(绿色荧光)，肌节清晰可见。TEM显示心肌细胞独有的肌 纤维亚细胞结构。hTNNl3K组心肌细胞相关基因高表达(pO．05)。Western blotting 显示心肌特异性蛋白MLC2、cTnT、cTnI、a．actinin等显著高于其对照组(球O．05)， 且细胞免疫荧光双染结果显示MHC6蛋白提前表达。FCM结果显示cTnT+阳性细 胞率显著高于对照组(po．05)。干扰shRNA组不仅cTnT+阳性细胞率显著低于对 照组(卿．05)，而且心肌特异蛋白也显著低于对照组(则．05)，MHC6蛋白表达 延后。通过检测Connexin45、Connexin40和Cmt相对表达量，我们发现，这三个 基因表达量无统计学差异(PO．05)。通过检测MAPK信号通路相关蛋白发现， hTNNl3K组P-p38、P-ERK和P．JNK均被抑制，且P-P38和P．JNK蛋白抑制更明 显，而Flag．only组、shRNA组和non-sense RNA组信号通路蛋白均正常表达。 结论 TNNl3K基因过表达促进mESC向心肌细胞分化，且MAPK信号通路可能参与 了该基因诱导mESC分化为心肌细胞的过程。 关键词。TNNl3K；肌钙蛋白I；分化；过表达；RNA干扰 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院 中国医学科学院北京协和医学院 硕士学位论文 The role and mechanism of cardiac-specific kinase TNNl3K overexpression in differentiation ofmouse embryonic stem cells into cardiomyocytes Abstract Backgrond and objective m cardiac troponin I-interacting kinase(TNNl3K)，named for its interaction丽m the cardiac troponin-I，is a cardiac specific kinase，and belongs to the M队PK family．Over the past decades，studies have shown that，on the one hand，11m虹3K might be involved in some pathological process，such as promoting a concentric hypertrophy,prolonging the PR interval and accelerating the progression of dilated cardiomyopathy,et a1．On the other hand，TNNl3K played a protective role in attenuating ischemia-induced ventricular remodeling，improving cardiac performance，inducing cardiomyocyte differentiation，and promoting cardiac myogenesis．et a1．According to the positioning of 1NNl3K gene on cllromosome，it was found that it closed nearly to the region of susceptibility genes of heart ventricular septal defect．Therefor,we speculated that TNNl3K participated in the normal heart development．This study aims to explore the role and mechanism of TNNl3K gene in mESC differentiation into my