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四株IBDV-VP2 单抗的抗原表位的鉴定和序列分析1 王小娥，朱彩霞，崔金生，孙寅剑，杨春晓，肖海君，曲朝杰，朱瑞良 山东农业大学动物科技学院，山东泰安（271018 ） E-mail: zhurl@ 摘 要：为研究传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus ，IBDV)的致病机理及研制 有效的IBDV 疫苗，用噬菌体展示技术对IBDV VP2 抗原表位进行筛选。以4 株IBDV VP2 单克隆抗体 1B5、5D1、2H11 和I-4-4-3 作为筛选分子，对噬菌体展示 12 肽库进行3 轮“吸 附-洗脱-扩增”淘洗，从每株单克隆抗体筛选到的噬菌斑中随机挑取15 个单克隆蓝色噬菌斑， 进行间接ELISA 检测，A405 值均大于 1.00，且均大于阴性对照A405 值的2 倍；用竞争抑制 ELISA 分析，单克隆抗体和IBDV 抗原均能竞争抑制筛选 12 肽与固相包被单克隆抗体的反 应，抑制率大于 40% ，表明在该 12 肽内含有IBDV 抗原表位。选取 20 个单克隆噬菌斑(5 个单克隆噬菌斑×4 株单克隆抗体) ，经噬菌体pIII 部分基因的核苷酸序列测定，确定了4 个 优势 12 肽为不同IBDV 抗原表位，这4 个 12 肽在一级结构上没有3 个以上连续氨基酸与 GenBank 中IBDV VP2 的氨基酸序列相同之处，推测可能是构象依赖性表位。 关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV)；抗原表位；序列分析 传染性法氏囊病（Infectious bursal disease, IBD ）是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus, IBDV) 引起鸡和火鸡致病的一种急性、热性、高度接触性传染病。该病 毒的感染可以使鸡群致病、死、生产性能下降；另外该病毒侵害雏禽淋巴组织，尤其是中枢 免疫器官――法氏囊，对其他疫病的易感性增强，饲养成本增加的同时导致药物残留，危害 人类健康，造成经济损失。 IBDV 基因组由A 、B 两个双链RNA 组成，包括5’端非编码区、编码区和3’端非编码 区，共有五种病毒蛋白：VP1 、VP2 、VP3 、VP4 和VP5 。VP2 和VP3 是病毒的主要结构蛋 白，构成病毒衣壳，VP2 相对含量较多，占病毒蛋白的51 ％，既是IBDV 的主要结构蛋白， 又是病毒的主要宿主保护性抗原。VP2 上至少携带三组抗原表位，即中和性抗原表位、非中 和性抗原表位和毒力相关性抗原表位。中和性抗原表位可诱生保护性中和抗体，被认为VP2 与IBDV 的免疫效力有密切关系[1-4] 。近年来通过对IBDV 分子生物学研究证实，VP2 可诱 导机体产生保护性中和抗体，因此基因工程疫苗的研制主要围绕VP2 基因展开。VP2 在不 同系统的表达产物有很多特点：具有高度的构象依赖性；VP2 的多聚体有很强的免疫原性； VP2 基因无糖基化位点，有免疫原性。 目前对IBDV VP2 抗原表位的研究已有报道。Azad[5]等通过敲除作图和选择IBDV 逃逸 突变株，运用VP2 的单抗证明VP2 的2 个亲水区存在构象表位；也有人利用噬菌体展示肽 库证实，VP2 存在构象表位[6-7] [8] 和线性中和表位 ，更多的表位有待进一步分析。 本研究运用建立的4 株IBDV VP2 单克隆抗体(mAb) 1B5、5D1、2H11 和I-4-4-3 ，作为 筛选分子，对噬菌体表面展示随机12 肽库进行淘选，得到了含有IBDV VP2 的抗原表位的 短肽，分析其序列，进一步揭示了VP2 的抗原结构，为IBD 多表位疫苗的研制奠定基础。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 单克隆抗体 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（20060434011 ），山东省博士后科研项目择优基金，国家人 事部博士后基金，山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(03BS140)的资助。 - 1 - I