pla2g16磷脂酶通过活化mapk通路促进骨肉瘤的发展转移及抗药性生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

目 目 录 摘要 1 Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．jI 前言日盯青 ． ． ． ． ．．55 材料 8 方法 1 1 第一部分质粒提取及稳转细胞株的构建 11 第二部分表型分析 l 4 第三部分机制研究 1 7 第四部分裸鼠体内成瘤 l 8 第五部分临床样本统计分析 1 8 结果及分析 20 1．PLA2G16促进骨肉瘤细胞的生长，侵袭和迁移，克隆形成 及极性依赖性生长 20 2．P L A2 G 1 6的表达降低了骨肉瘤细胞对化疗药物的 敏感性 26 3．PLA2G l 6的癌基因功能与其细胞核内表达相关并通过 活化MAPK通路实现 30 4．PLA2G1 6基因促进了裸鼠的成瘤 36 5．PLA2G16通过促进p-ERKl／2的表达降低了骨肉瘤患者 万方数据 生存率 生存率 3 7 讨论 43 结论 45 参考文献 46 综述 51 一．野生型p53的抑癌功能 53 二．突变p53的增益功能表型(GOF) 57 三．p53与肿瘤治疗 64 结论 68 参考文献 70 攻读学位期间发表文章情况 88 致谢 89 万方数据 大连医科大学硕士学位论文PLA2G1 大连医科大学硕士学位论文 PLA2G1 6磷脂酶通过活化MAPK通路促进骨肉瘤的 发展转移及抗药性 研究生姓名：李霖 指导教师：熊舜斌教授 专业名称：生物化学与分子生物学 摘要 目的 阐明PLA2G16基因的表达与人骨肉瘤发生发展的相关性，明确PLA2G16磷脂 酶在调节骨肉瘤转移与恶化过程中的作用机理；探索PLA2G16作为骨肉瘤临床治疗 标志物的潜在价值，为确立PLA2G16作为骨肉瘤诊断与治疗的新靶点提供依据。 方法 1)逆转录病毒或慢病毒包装系统建立PL墟G16稳定高表达或敲低的骨肉瘤 细胞系，利用这些细胞系分析PLA2G16的高表达或敲低表达分别对细胞增殖(MTT assay)、迁移(Wound．healing assay)、侵润(Matrigel Transwell assay)、克隆形成(Colony Formation)、极性依赖性生长(Soft agar assay)和药物敏感性的影响。同时对 PLA2G16基因进行C113S突变使其失去磷脂酶活性，检测PLA2G16一C113S对骨 肉瘤细胞表型的影响。 2)利用qRT-PCR及Western bot等技术探索PLA2G16促进骨肉瘤发展转移的 作用机制。使用小分子抑制剂分别抑制PLA2G16的磷脂酶活性及其靶蛋白的表达 进一步证实PLA2G16是通过发挥磷脂酶活性而作用其靶蛋白，进而影响骨肉瘤的 发展转移。 3)将PLA2G16稳定高表达的细胞株通过皮下注射种入裸鼠进行动物实验， 观察PLA2G16对其成瘤率的影响，并通过Western blot等检测PLA2G16及其下游 蛋白的表达。 4)采用组织芯片和免疫组化技术，检测骨肉瘤组织中PLA2G16及其靶蛋白 万方数据 大连医科大学硕十学位论文的表达；收集骨肉瘤患者的临床资料分析PLA2G16及其调控的下游蛋白与骨肉瘤 大连医科大学硕十学位论文 的表达；收集骨肉瘤患者的临床资料分析PLA2G16及其调控的下游蛋白与骨肉瘤 发生与发展的相关性。 结果 1)PLA2G16磷脂酶的表达促进了骨肉瘤的增殖，克隆形成能力，极性依赖性 生长，侵袭与迁移。 2)骨肉瘤细胞中PLA2G16的表达降低了其对传统化疗药物的敏感性，且这 种作用具有时间和剂量累加效应。 2)PLA2G16的癌基因功能与其细胞核内表达相关并通过活化MAPK通路促 进其发展转移。 3)PLA2G16的表达促进裸鼠的成瘤。 4)PLA2G16通过促进ERKl／2的磷酸化降低了骨肉瘤患者生存率。 结论 1)PLA2G16作为一种癌基因，通过活化MAPK通路促进了骨肉瘤的发展转移。 2)PLA2G16可被确立为骨肉瘤诊断治疗的靶点。 关键词：PLA2G16骨肉瘤转移MAPK通路抗药性 万方数据 大连医科大学硕士学位论文PLA2G16 大连医科大学硕士学位论文 PLA2G16 Promotes Osteosarcoma Metastasis and Drug Resistance via MAPK Pathway Master degree candidate：Li Lin Supervisor：Prof．Xiong Shunbin Maj or：Biochemistry and molecular biology Abstract objective Clari矽the correlation between the expression