lif在胃癌中的表达及对胃癌细胞生物学行为的影响外科学普通外科专业论文.docxVIP

解放军医学院博士学位论文缩略词表 解放军医学院博士学位论文 缩略词表 缩略语 英文全称 中文全称 HRP Horseradish pemxidaSe 辣根过氧化物酶 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 TMB Tetramethylbenzidine 四甲基联苯胺 PVDF PolyVinylidene nuoride 聚偏二氟乙烯 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 DIAB 3．3’Di帅inobenzidine 二氨基联苯氨 EDlA Ethylene di锄ineteI．accetic acid 乙二胺四乙酸 DMSO Dimethyl suIfoxide 二甲基亚砜 FBS Fetal calf serum 胎牛血清 SPF Specific pathogen free 无特定病原体 mIn mmUte 分钟 h hour 小时 LIF Leukemia illhibito巧fjlctor 白血病抑制因子 LIFR Leul(emia inhibito叫f．actor receptor 白血病抑制因子受体 mRNA Messenger抽0nucleic acid 信使核糖核酸 万方数据 解放军医学院博士学位论文Quantitative 解放军医学院博士学位论文 Quantitative real time reverse逆转录聚合酶链式反应-实时 qRT—PCR transcriptaLSe polymerase chain reaction 定量 shRNA Short hairpin RNA 短发夹RNA siRNA Small interferjng RNA 小干扰RNA 2 万方数据 解放军医学院博士学位论文作 解放军医学院博士学位论文 作 者：边识博 学科专业：外科学(普通外科) 导 师：陈凛 LIF在胃癌中的表达及对胃癌细胞生物学行为的影响 中文摘要 背景 近年来随着胃癌相关诊疗技术的不断进步，胃癌患者的总体生存率得到了显 著提高，但其整体治疗效果仍不十分理想。肿瘤的增殖、侵袭和转移是其重要的 恶性生物学行为，从根本上寻找肿瘤发生、发展及恶性生物学行为的调节机制， 可以有效提高胃癌的治疗效果。 目的 研究LIF在胃癌中的表达情况与病理学参数及预后的相关性，评价其在胃癌 诊断方面的价值，探索LIF对胃癌细胞增殖、侵袭、转移等生物学行为的影响， 并进一步探讨具体作用机制。 方法 1．利用ELISA技术检测208例胃癌患者、67例慢性萎缩性胃炎患者和70例正 常人LIF因子外周血表达水平。免疫组织化学染色检测128例胃癌石蜡切块LIF 和LIFR在组织中的表达。通过W色stem blot和qRT-PCR方法检测40例胃癌新鲜 组织样本及配对的癌旁正常组织中LIF和LIFR蛋白和mIⅢA的表达情况，并与 临床病理学参数及预后进行相关性分析。2．筛选LIF低表达、LIFR高表达的胃癌 细胞株(Wrestem blot和qImPCR方法)。利用IⅢA干扰技术，借助质粒为载体， 敲低胃癌细胞株中LIFR的表达。通过CCK．8、EdU和平板克隆实验检测加入外源 性LIF因子及沉默LIFR基因后，对胃癌细胞增殖能力的影响。采用流式细胞技术 检测LIF及沉默LIFR对胃癌细胞的细胞周期分布和凋亡的影响。采用Tr孤swell 实验观察LIF及沉默LIFR对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响。通过裸鼠体内成瘤 模型探讨LIF及沉默LIFR后对肿瘤生长的影响。3．Wrestem blot法和细胞免疫荧光 染色技术检测LIF对Hippo一Ⅵ心信号通路中核心元件的影响及相互关系。利用 siIⅢA沉默信号通路下游YAP蛋白表达后，通过CCK．8实验检测LIF是否主要通 3 万方数据 解放军医学院博士学位论文过Hippo-YAP信号对胃癌细胞增殖产生影响。 解放军医学院博士学位论文 过Hippo-YAP信号对胃癌细胞增殖产生影响。 结果 1．胃癌患者、慢性萎缩性胃炎患者、正常人外周血LIF水平分别为8．650±6．282 p∥ml、4．325±1．824 pg／ml、3．344±1．91 8 pg／ml。胃癌患者LIF水平明显高于慢性 萎缩性胃炎患者(P=O．003)和正常人(P0．001)。LIF诊断胃癌的界值为5．585 pg／ml， 诊断敏感度：88．14％，特异度：81．82％，准确度：85．64％。免疫组化结果显示： LIF和LIFR在胃癌中的阳性表达率明显高于正常粘膜(P0．001)，与肿瘤分化程 度(P=O．021)、脉管浸润(P=O．001)、T分期(P=O．001)、淋巴结转移(P=0．001) 及pTNM分期(P=0．012)存在相关性。相同肿瘤组织中