pams对人肝癌hepg2细胞的杀伤及抗癌分子作用机理初步研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

西南交通大学硕士学位论文主要工作(贡献)声明本人在学位论文中所做的主要工作或贡献如下： 西南交通大学硕士学位论文主要工作(贡献)声明 本人在学位论文中所做的主要工作或贡献如下： (1)研究了PAMs(天然植物抗菌液)对肝癌细胞株HepG2、乳腺癌细胞株MCF．7、 MDA．MB-231的作用效果，探讨PAMs对于肝癌HepG2细胞的分子作用机理。结果表 明，PAMs对三种恶性肿瘤细胞的增殖都具有抑制效果，且效果都呈剂量与时间依懒性。 划痕实验、transwell实验确认PAMs可抑制这三种恶性肿瘤的迁移能力。FQ．PCR、 Western blot实验结果发现PAMs抑制肝癌HepG2细胞的机理与foxml、p53等基因的 调控有关。 (2)建立裸鼠肝癌HepG2细胞的肿瘤模型，体内实验研究PAMs抗肝癌的作用， 选用ELISA、HE染色、ttmel、免疫组化、FQ-PCR等不同实验方法探究其分子作用机 理。结果发现，PAMs不仅能in vitro抑制恶性肿瘤，也能in vivo有效抑制肝癌肿瘤的 生长。一系列实验发现，PAMs对Hep02的抑制作用机制存在多条途径。一方面它能 够通过下调VEGF、上调IL．12抑制肝癌肿瘤血管的生成，下调MMP．2的表达，抑制 HepG2细胞的迁移；同时促进肿瘤坏死因子TNF．a的表达，直接杀伤细胞；另一方面， PAMs也通过下调FoxMl的表达量，激活caspase3、caspase9的表达，达到增加肿瘤细 胞凋亡率的目的。 本人郑重声明：所呈交的学位论文．是在导师指导下独立进行研究工作所得的成 果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰 写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明。 本人完全了解违反上述声明所引起的一切法律责任将由本人承担。 学位论文作者签名：J即碡惰 日期：)Qlb．d 万方数据 西南交通大学硕士研究生学位论文 西南交通大学硕士研究生学位论文 第1页 摘要 根据最新的数据统计显示，恶性肿瘤目前已成为全球范围内致死率排名第二的疾 病，每年新增的病例数量都呈现上升趋势。寻求安全、有效、无或低毒副作用的预防、 治疗手段和抗癌药物成为该领域生命科学与医药科学工作者的重要追求。在抗肿瘤新 药的研发领域中，无需手术、副作用小等优点让天然植物药物成为新的热点。天然植 物抗菌液(PAMs)是由云南民族医药研究所有限公司研发的一种新型民族医药复方制 剂，经用乙醇提取红花、芸香草、刺天茄、紫草等多种天然药用植物的有效成分精制 而成。民间体验和前期研究证实，PAMs具有抗菌消炎、伤口愈合、溃疡修复等多种功 效，体外研究还发现，PAMs对白血病、肝癌、乳腺癌、宫颈癌等多种恶性肿瘤细胞株 均有强的杀伤作用，揭示PAMs作为一种传统民族医药在抗癌领域的潜力和前景。作 为一种含有多种植物成分的复方制剂，PAMs的抗癌作用及分子机理尚需探究。本论文 中，我们以人源肝癌HepG2细胞为主要研究对象，探究PAMs在体内外对其的抑制作 用及分子作用机理。同时初步探究了PAMs对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB．231的体 外杀伤作用。 首先，以Hep02、MCF·7、MDA-MB-231三株恶性肿瘤细胞为对象，初步研究了 PAMs对他们的杀伤作用。形态学观察与CCK8法确定了PAMs对三种细胞的增殖均具 有杀伤作用，且杀伤效果与药物浓度、作用时间呈依赖性。细胞划痕实验、Transwell 实验结果相互印证了PAMs可以有效抑制这三种细胞的体外迁移。随后，以HcpG2细 胞为研究对象，Western Blot法检测到与细胞凋亡有关的FoxMl蛋白表达量的下调， 抑癌基因p53蛋白表达量的上调，与预期结果一致。 然后，选用了BALB／c(nu／nu)裸鼠建立体内Hop(}2移植瘤模型，共设定阴性对 照组(Alcohol control组)、药物组(PAMs组)、提前给药组(Pro．PAMs组)、阳 性对照组(5-Fu组)四组。裸鼠左腋皮下注射HepG2细胞后100％成瘤。接种细胞后 三周处死裸鼠，剥离出裸鼠肿瘤组织，解剖观察其脏器生长情况，称量瘤重、肝重量、 脾脏重量，计算抑瘤率、肝指数、脾脏指数。HE染色观察肿瘤病理变化，Tuncl法观 察肿瘤细胞凋亡情况，免疫组化测定不同实验组移植瘤组织细胞中caspase3、caspase9 蛋白表达量的变化，ELISA测定裸鼠经过药物治疗后血清中IL．12、TNF-ct、VEGF的 变化。FQ-PCR、Western Blot从mRNA水平和蛋白水平探究PAMs对肝癌的抑制作用 途径。结果显示，与阴性对照组相比，PAMs组、Prc-PAMs组、5．Fu组的抑瘤率分别 万方数据 西南交通大学硕士研