spo0a基因突变对解淀粉芽孢杆菌peba20生物膜和抑菌活性的影响森林保护学专业论文.docxVIP

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2019-01-20 发布于上海
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spo0a基因突变对解淀粉芽孢杆菌peba20生物膜和抑菌活性的影响森林保护学专业论文.docx

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spo0a基因突变对解淀粉芽孢杆菌peba20生物膜和抑菌活性的影响森林保护学专业论文

2．1．3．1主要仪器 2．1．3．1主要仪器．13 2．1．3．2生化及分子生物学试剂．13 2-2实验方法 14 2．2．1 Bacillus．amyloliquefaciens PEBA20菌株运动性表型测定 14 2．2．2 spoOA基因突变株的构建．．14 2．2．2．1 spoOA基因突变株构建方法设计 14 2．2．2．2突变引物设计．1 5 2．2．2．3 spoOAF-spoOAB-pMDl8-T连接质粒和自杀质粒pWM91的提取．．16 2．2．2．4 spoOAF-spoOAB—pMDl8-T重组质粒与pWM91自杀质粒的BamH I酶切 17 2．2．2．5酶切产物乙醇沉淀．17 2．2．2．6乙醇沉淀物NotI酶切 17 2．2．2．7琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物．．18 2．2．2．8酶切产物胶回收 18 2．2．2．9 spoOAF-spoOAB-pMDl8·T重组质粒和pWM91自杀质粒双酶切产物连接．．18 2．2．2．10 Bacillus．amyloliquefaciens PEBA20感受态的制备 19 2．2．2．11 spoOAF-spoOAB-pWM91质粒电转化 19 2．2．2．12筛选获得第一次重组的Bacillus．amyloliquefaciens PEBA20菌体．．19 2．2．2．13筛选获得第二次重组的Bacillus．amylo脚uefaciens PEBA20菌体．20 2．2．2．14菌液PCR验证．20 2．2．2．15序列测定分析 21 2．2．3 Bacillus．amyloliquefaciens PEBA20 AspoOA菌株运动性表型测定 2l 2．2．3．1 Bacillus．amyloliquefaciens PEBA20 AspoOA菌株swarming运动性表型测定．．21 2．2．3．2 Bacillus．amyloliquefaciens PEBA20 AspoOA菌株twitching运动性表型测定 2l 2．2．4 Bacillus．amyloliquefaciens PEBA20 AspoOA菌株生物膜表型测定 2l 2．2．4．1 Bacillus．amyloliquefaciens PEBA20厶poOA菌株固气界面生物膜表型测定 21 2．2．4．2 Bacillus．amyloliquefaciens PEBA20 AspoOA菌株气液界面生物膜表型测定 22 2．2．5 Bacillus．amyloliquefaciens PEBA20 AspoOA菌株芽孢及菌体形态特征测定 22 2．2．6 Bacillus．amylo脚uefac耙ns PEBA20 AspoOA菌株抑菌活性的测定 22 n 万方数据 2．2．