高中生物选修三 基因工程的基本操作程序.pptVIP

一、从基因文库中直接获取目的基因 cDNA文库的构建 二、利用PCR技术扩增目的基因 PCR的全称：聚合酶链式反应 PCR的原理： DNA复制 1D 2B 3C 4.（1）） 生物体细胞中分离 化学方法人工合成 （2）转录 逆(或反)转录 4种脱氧核苷酸 逆转录酶 （3）质粒 限制性内切酶（内切酶） DNA连接酶 碱基互补配对 （4） B 5． ① 大于 ② 反转录酶 可以 ③ DNA cDNA 耐高温 6.（1）目的基因—载体连接物 载体--载体连接物 目的基因--目的基因连接物 （2）载体--载体连接物 （3）启动子 mRNA （4）EcoRI和BamHI * * 1.阐述基因文库概念、分类、构建目的 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 种类 基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 目的：获取目的基因。 2.阐述基因文库的构建过程 （1）基因组文库的构建 提取某生物 全部DNA 用适当 限制酶切割 许 多 DNA片段 与载体连接 导入受体菌群 该生物基 因组文库 （每个受体菌含有一段不同的DNA片段） （2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成 与载体连接 导入受体菌群 mRNA 逆转录酶 杂交双链 核酸酶H 单链DNA DNA聚合酶 双链DNA (cDNA) 该生物 cDNA文库 基因组文库的构建 提取某生物 全部DNA 许 多 DNA片段 该生物基 因组文库 与载体连接 导入受体菌群 mRNA 单链DNA 双链DNA 逆转录 杂交双链 3.基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 内含子 外显子 转录 mRNA前体 加工 翻译 肽链 启动子 终止子 成熟mRNA 能够编码蛋白质的序列。 不能够编码蛋白质的序列。 外显子: 内含子: 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 相同点 编码区是间隔的、_____的 编码区是 _____的 不同点 真核细胞 原核细胞 4.原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 模板 原料 引物 　酶 ——DNA片段 ——四种脱氧核苷酸 ——单链DNA分子片段 ——耐热的DNA聚合酶 PCR的条件： PCR的过程： 利用PCR技术扩增目的基因 变性(90-95℃) 复性(55-60℃) 延伸(70-75℃) 三、用化学方法直接人工合成 条件： 基因较小，核苷酸序列已知。 DNA合成仪 蛋白质的氨基酸顺序 mRAN 核苷酸序列 基因DNA的核苷酸序列 目的 基因 推测 推测 合成 DNA合成仪 例如 质粒 目的基因 限制酶 DNA连接酶 重组DNA 四、基因表达载体的构建 基因表达载体的构建过程 限制性核酸内切酶、DNA连接酶 用同种限制性核酸内切酶分别切割质粒和目的基因的两端 基因表达载体的组成： 2.基因表达载体的启动子、终止子的作用，与起始密码、终止密码作用是否相同？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 不相同。启动子、终止子的作用是调控基因转录过程；起始密码、终止密码的作用是调控翻译过程 3.如果目的基因不构建成表达载体能否复制与表达？为什么？ 目的基因在受体细胞中不能自我复制，不能稳定存在，不能表达和发挥作用。 因为质粒中有复制原点；有启动子、终止子等调控组件。 例1.水稻种子中70％的磷以植酸形式存在。植酸易同铁、钙等金属离子或蛋白质结合排出体外，易引起水华。为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植酸酶基因的流程。 学科网 ①图中基因组文库__________(小于/等于/大于)cDNA文库。 ②B过程需要的酶是__________；A、C过程中__________(可以／不可以)使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。 学科网 大于 反转录酶 可以