去泛素化酶usp27x在细胞中的分子功能及与肿瘤的关系生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 硕士学位论文摘 硕士学位论文 摘 要 去泛素化酶(deubiq试tinating enzymes，DUBs)通过水解泛素羧基末端的肽 键、异肽键或者酯键，将泛素小分子特异性地从靶蛋白或前体蛋白上水解下来， 以保护靶蛋白不通过泛素一蛋白酶体途径降解。USP27x(Ubiquitin Carboxyl．terminal Hydrolase 27)是去泛素化酶中USP家族的一员，开放阅读框具 有1317bp，编码438个氨基酸，具有一个USP活性催化域。生物信息学分析表 明USP27X与同家族的USP22氨基酸序列具有82％的一致性，但至今对USP27x 的研究非常少，其生化特征和生物学功能仍然不清楚。 本课题研究发现USP27x在人体各组织中都有表达，其中肝脏、胰腺表达量 为最高，肺、乳腺中表达量较低。免疫组化和免疫荧光的结果表明USP27x主要 定位于细胞质，但是与其高度同源的USP22却定位于细胞核。USP27x与USP22 在细胞内定位上的明显差异，表明USP27x在细胞内可能具有不同于USP22的分 子功能。 为了明确USP27x是否对其它分子具有调控的能力，我们首先在体外明确 USP27x为具有功能活性的去泛素化酶，然后通过在细胞内过表达USP27x，筛查 细胞内蛋白分子的变化，发现USP27x的增加可导致p21蛋白表达量的增加，而 这种增加在使用蛋白酶体抑制剂MGl32处理细胞后消失，表明USP27x能通过蛋 白酶体途径影响p21的蛋白水平。 USP27x对p21的调控能力，促使我们推测USP27x很可能介导了肿瘤细胞的 恶性生物学行为。为了明确这种作用，我们通过克隆形成实验和MTT实验发现 过表达USP27x可促进乳腺癌细胞MCF．7的增殖。通过细胞周期实验发现，过表 达USP27x导致细胞周期G1期减少，S期增加，促进细胞周期Gl期向S期的转 换。 本研究初步揭示了去泛素化酶USP27x的生化特征、在细胞中的分子功能以 及与肿瘤的关系，为进一步深入研究USP27x在细胞中的功能作用，揭示其介导 肿瘤增殖的分子机制奠定了基础。 关键词：肿瘤；USP27x；去泛素化酶；亚细胞定位 II 万方数据 万方数据 去泛素化酶USP27x在细胞中的分子功能及与肿瘤的关系Abstract 去泛素化酶USP27x在细胞中的分子功能及与肿瘤的关系 Abstract Deubiquitination enzymes specifically hydrolyse off the ubiquitin from the target protein or the precursor protein by hydrolys ing the carboxyl—terminal peptide bond， peptide bond or isobutyl ester bond of ubiquitin，which can protect the target protein from the degradation through the ubiquitin-proteasome pathway．USP27x(Ubiquitin Carboxyl—terminal Hydrolase 27)is a member of the USP family，whose ORF is 1 3 1 7 bp and encodes 43 8 amino acids，with a predicted USP active catalytic domain． USP27x has 82％homology with USP22 of the same USP family by bioimformatics analysis．With little report about USP27x，the biochemical characteristics and biological function of USP27x are still unclear nOW． Our research found that USP27x protein is widely expressed in human tissues， with its highest expression in liver and pancreas and low expression in lungs and mammary gland．．Immunohistochemical and immunofluorescenee results shown that USP2 7x is mainly localized in the cytoplasm while USP22 is