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短序列增强子和alu重复序列影响基因表达的实验研究和生物信息学分析免疫学专业论文
河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺
河北医科大学
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本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则,承担相应的法律责任。
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研究生签名:局名、笏每师签章: 二级学院领导盖章:《≥誊誊i
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河北医科大学 研究生学位论文独创性声明
本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注等内容外,文中不包含其他人己发表或撰写的研究 成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。
研究生签名:取.纽 导师擗觇
”,厂年中月多/日
万方数据
目
目 录
中文摘要 l
英文摘要 J gl 8
英文缩写 18
研究论文短序列增强子和Alu重复序列影响基因表达的实验研究和生物 信息学分析
引言√1日 19
第一部分短序列增强子及其衍生序列对GFP基因表达的影响
前言刖茜 212l
材料与方法 I B 22
结果 O Bt m ml 37
附图 O 0 D O 40
附表 45
讨论 50
小结 5l
参考文献 52
第二部分柚重复序列影响GfP报告基因表达的实验研究
前言日U舌 5555
材料与方法 0 0 55
结果 59
附图 63
附表 69
讨论 gl B 70
小结 72
参考文献 O Q”O 72
第三部分Ⅸ珠蛋白基因簇中SINE重复序列生物信息学分析
前言月U吾 。7。777
材料与方法 75
结果 78
附图 Q O· 81
万方数据
附表
附表 87
讨论 90
小结 91
参考文献 9l
结{金 , ”99
综述一RNA活化基因表达的研究进展 100
综述二鼢认在转录水平影响基因表达的研究进展 109
致谢 117
个人简历 118
万方数据
中文摘要短序列增强子和Alu重复序列影响基因表达的
中文摘要
短序列增强子和Alu重复序列影响基因表达的
实验研究和生物信息学分析
摘 要
目的:顺式作用元件是位于DNA分子中调节基因表达的序列,对基 因表达调节有重要的作用,但是这些顺式作用元件的功能及调节基因表达 的作用机制大部分仍然未被阐明。研究顺式作用元件调控影响基因表达的 作用机制,对于研究生物表观遗传、分化、衰老和肿瘤发生等生物学现象 具有重要的意义。
增强子是一种活化基因的顺式作用元件,能够增强基因表达,在调节 基因表达过程中发挥着重要作用。基因表达调节是当前生物学中的一个焦 点问题,与衰老,分化,肿瘤发生等多种生物学现象相关。为了更深地理 解这些生物学现象,必须阐明基因表达调节的机制。虽然基因表达调节机 制非常复杂,但是可以用简化的系统进行研究。为了研究短序列增强子活 化基因的作用机制,我们在前期工作中建立了一个简化的研究系统:利用 Alu元件抑制GFP报告基因表达,用绿色荧光蛋白表达系统研究短序列 DNA及其衍生序列的增强子活性。本研究室在前期工作中,由14个拷贝 的Alu同向串联(Alux 14)插入到pEGFP.Cl质粒中GFP报告基因的下 游,从而构建C1-Aluxl4质粒。我们发现将C1-Aluxl4质粒瞬时转染HeLa 细胞后,Alux 14序列对GFP报告基因表达具有显著抑制作用;短序列 AA(5 7.GTGAAATAAATGCAAATAAAGT)插入C 1-Alux 14质粒中GFP
基因和Alux 14序列之间构建的C1-AAx2.Alux 14质粒瞬时转染HeLa细 胞后,短序列AA可以部分解除Aluxl4序列对GFP报告基因表达的抑制 作用,表现出一定的增强子活性。在本研究中,我们重点研究的是AA序 列及其突变序列调节GFP报告基因表达的作用机制及增强子序列的结构 对基因表达所产生的影响。
Alu元件是人的主要短散布核元件(S腿),有一百多万拷贝,大约
占全部人类基因组的十分之一,在生物进化过程中SINE一直是强制存在, 因此多数学者认为SINE具有重要的生物学功能。然而,至今为止多数 Alu元件的生物学功能仍未阐明。许多证据表明Alu元件属于沉默子,其
万方数据
中文摘要可以抑制基因表达。在细胞核中Ah
中文摘要
可以抑制基因表达。在细胞核中Ah RNA作为转录协同抑制物,是反义 转录组中最多的部分,具有以顺式作用或者反式作用的方式下调正义表达 的可能性。我们的前期研究表明Alu元件通过触发染色质紧密包装抑制
GFP报告基因表达。虽然认为触元件属于沉默子,但是在看家基因和高
表达染色体中,Alu元件含量却十分丰富,这个
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