cd164通过pten调控人脑胶质瘤生长和凋亡的研究神经外科专业论文.docxVIP

博士学位论文 博士学位论文 者均为首次接受胶质瘤手术，术前均未接受放化疗治疗。其他排除标准包括急 慢性感染、吞咽困难、充血性心力衰竭、COPD和肝硬化、机体其它部位肿瘤 等。采用RT-PCR方法检测人脑胶质瘤组织中CDl64的表达情况；RT-PCR及 Western blot法检测人胶质瘤细胞系U251、SHG．44和U87以及人正常星形胶质 细胞系NHA中CDl64的表达。 结果：所有标本经HE染色证实均为胶质瘤。对50例胶质瘤标本进行 RT-PCR检测结果表明：与非瘤脑组织标本相比，CDl64在胶质瘤样本组织中 mRNA水平明显升高“=一18．128，P0．001)，差异有统计学显著性；RT-PCR检 测结果表明CDl64 mRNA在人胶质瘤细胞系U25 1、SHG．44和U87中的表达 含量明显高于人正常星形胶质细胞系NHA中的表达，而western blot检测结果 表明CDl64在胶质瘤细胞系中的表达较NHA显著升高，鉴于U87细胞中的 CDl64表达高于U251和SHG．44细胞系，U87被选择进一步研究CDl64在胶 质瘤细胞中的作用。 结论：CDl64 mRNA在人脑胶质瘤组织中的表达明显升高，同时CDl64 蛋白在多种胶质瘤细胞系中的表达显著升高。 2．CDl64慢病毒表达载体的构建及其对人胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响 目的：通过构建靶向干扰CDl64表达的人脑胶质瘤细胞系U87的慢病毒载 体，观察沉默CDl64表达后对U87细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白表达的影 响。 方法：通过慢病毒感染的方式将CDl64基因的短发夹状RNA(shRNA) 感染至人脑胶质瘤U87细胞，从而获得稳定沉默CDl64基因的U87细胞；通 过RT-PCR及western blot检测感染CDl64 shRNA后对CDl64 mRNA及蛋白表 达的影响；CCK．8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot 检测感染慢病毒后对U87细胞凋亡相关蛋白caspase 3、Bax及Bcl2表达的影 响。 结果： III 万方数据 摘要1．感染CDl64 摘要 1．感染CDl64 shRNA后U87细胞中CDl64 mRNA和蛋白表达量较感染 前明显降低。CDl64 mRNA在U87／shCDl64组细胞和U87／shNC组细 胞中的相对表达量分别为O．35士O．04和1．06 4-O．14，两组相比较有统计 学显著性(尸0．001)；Western blot检测结果表明，CDl64蛋白在 U87／shCDl64组细胞和U87／shNC组细胞中的相对表达量分别为O．57 4- 0．07和1．64 4-0．21，两组之间相比较有显著性差异(尸0．001)。 2．细胞生物学功能性实验结果表明：与阴性对照组相比较，感染 shCDl64至U87细胞后，U87细胞生长明显被抑制，同时细胞凋亡显 著增加，差异均有统计学意义(尸O．05)。 3．感染shCDl64后对U87细胞凋亡相关蛋白表达的影响：蛋白质印迹结 果表明感染shCDl64至U87细胞后可上调cleaved．caspase 3和Bax在 U87细胞中的表达，并下调Bcl2在细胞中的表达。 结论：成功构建高效能沉默CDl64基因的shRNA表达载体，该载体感染 至人胶质瘤U87细胞系后可显著抑制U87细胞增殖，并诱导细胞凋亡，同时调 控凋亡相关蛋白caspse 3、Bax和Bcl2在U87细胞中的表达。 3．慢病毒RNA干扰C!)164对人胶质瘤裸鼠皮下瘤生长和凋亡的影响 目的：将慢病毒介导的U87．shCDl 64细胞注射入裸鼠皮下，观察慢病毒介 导的CDl 64基因沉默效果，同时观察其对胶质荷瘤裸鼠增殖和凋亡的影响。 方法： 1．运用随机数字表法将30只SPF级雌性BALB／C裸鼠分为三组，将已建 立的稳定沉默CDl64的U87．shCDl64细胞，阴性对照组U87．shNC细 胞和空白对照组U87细胞分别经皮下注射至裸鼠胶质瘤皮下移植瘤模 型中。观察荷瘤裸鼠的进食、活动、精神状况和睡眠等情况，定期测 量皮下移植瘤的体积，移植术后第56天处死裸鼠，完整切除肿瘤组织 并称重，计算抑瘤率； 2．运用免疫组化检测Ki．67在各组肿瘤组织中的表达，RT-PCR检测 IV 万方数据 博士学位论文 博士学位论文 CDl64在各组皮下移植瘤中的表达； 3．TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡指数(apoptotic index．趟)。 结果： 1．从皮下注射肿瘤细胞的第10天开始，U87．shCDl64组裸鼠皮下移植瘤 的生长速度明显滞后于阴性对照组和空白对照组；实验结束后， U87-shCDl64组裸鼠皮下移植瘤重量为(0．78士O．23)g，明显低于