低剂量节拍化疗对卵巢癌细胞skov3血管生成拟态的影响及其机制的探讨妇产科学专业论文.docxVIP

河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论 验材料、原始数据、申报的专 否则，承担相应法律责任。 圻 研究生签名：洛琳 导师签章 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生签名：倍球 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 4 英文缩写 8 研究论文低剂量节拍化疗对卵巢癌细胞SKOV3血管生成拟态的影响 及其机制的探讨 前言日U舌 “O“ Q 一一9 材料与方法 9 结果 ．．23 附图 一25 附表 一32 讨{仑 一34 结{仑 一36 参考文献 一36 综述肿瘤血管生成及抗肿瘤血管生成治疗现状 39 致谢 一48 个人简历 ．．49 万方数据 中文摘要低剂量节拍化疗对卵巢癌细胞SKOV3血管生成拟态的影响及其 中文摘要 低剂量节拍化疗对卵巢癌细胞SKOV3血管生成拟态的影响及其 机制的探讨 摘 要 目的：血管生成拟态(vasculogenic mimicry，VM)是高侵袭性恶性 肿瘤细胞所具有的自我血供的微循环结构。本实验通过对荷人卵巢上皮性 癌SKOV3细胞裸鼠异种移植瘤模型行不同模式的顺铂(DDP)化疗获取 移植瘤原代细胞，比较接受低剂量节拍化疗(10w．dose metronomic chemotherapy，LDM)和最大可耐受剂量化疗(maximum tolerated dose chemotherapy，MTD)后SKOV3移植瘤原代细胞形成VM的能力、增殖 力及侵袭力，同时分析不同化疗模式对干细胞标记物CDl33、ALDHl蛋 白表达的影响，并比较CDl33+ALDHl+和CDl33。ALDHl。细胞形成血管生 成拟态的差异，以探讨不同模式化疗对卵巢癌SKOV3细胞形成VM的影 响及其可能机制。 方法： l建立裸鼠移植瘤模型并分组化疗：体外培养SKOV3细胞，将1×10 个细胞接种于雌性裸鼠右侧的大腿皮下，建立裸鼠异种移植瘤模型。2周 后选取30只荷瘤裸鼠随机分成三组：LDM组给予DDPImg／kg腹腔注射， 每日1次，共1 8次；MTD组给予DDP3mg／kg腹腔注射，每3日1次， 共6次；对照组给与等量生理盐水腹腔注射，每日1次，共18次。 2制备并培养肿瘤原代细胞：化疗结束后3．7天分批处死裸鼠，剥出 肿瘤经胶原酶消化、研磨、过滤、离心、洗涤，制得单细胞悬液，常规培 养72小时后获得肿瘤原代细胞。 3三维细胞培养(three．dimensional cell culture，3DCC)观察比较细 胞形成VM的能力：将三组原代细胞的单细胞悬液调整密度至5×104个 ／ml，接种到3DCC模型，利用倒置显微镜连续动态观察VM开始形成的 时间和最终形成密度，并计数血管生成拟态密度(vasculogenic mimicry density，VMD)。实验重复3次，并拍照记录。 4 MTT实验检测三组原代细胞的增殖能力。 5利用Transwell小室侵袭实验检测三组原代细胞的侵袭力。 万方数据 中文摘要6采用Westemblot法检测三组原代细胞中CDl33、ALDHl蛋白的表 中文摘要 6采用Westemblot法检测三组原代细胞中CDl33、ALDHl蛋白的表 达情况。 7流式细胞分选(Fluorescence．activated cell sorting，FACS)分选细 胞：培养MTD组原代细胞至足够数量，使用CDl33、ALDHl抗体依次 标记原代细胞，采用FACS分离获得两群细胞：荧光表达较强的细胞群为 CDl33+ALDHl+细胞，荧光表达较弱的细胞群为CDl33。ALDHl‘细胞。 8 3DCC观察比较形成VM的差异：将分选得到的CDl33+ALDHl+ 细胞以5×104个／ml的密度，CDl33。ALDHl一细胞以5×104个／ml和1x105 个／ml的密度，分别接种到3DCC模型培养并观察比较其形成VM的不同。 9统计学方法：实验数据采用SPSS 17．0统计软件进行统计，计量资 料以均数士标准差表示；多组间比较采用单因素方差分析，方差齐时多重 比较采用S-N．K法；方差不齐时采用Dunnett’S T3法。以a=0．05为检验 水准，当P0．05时，差异有统计学意义；当P0．05时，差异无统计学 意