atra通过调控肿瘤相关巨噬细胞极化抑制骨肉瘤转移的作用研究药理学专业论文.docxVIP

浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 致谢 致谢 在博士论文付梓之际，我的研究生生涯即将结束。在五年的科研学习生涯中， 我收获了一笔受益终身的珍贵财富。此时此刻，在此对我的两位敬爱的导师何俏 军教授和杨波教授表达我内心最诚挚的敬意和感恩。两位导师学识渊博、治学严 谨、视野宽阔、一丝不苟，体现了作为优秀博士生导师的高尚品格，这也是鞭策 我努力前行的最大动力。你们给予的完善的科研条件和自由的科研空间带我进入 这神圣的科学殿堂；你们与我分享学习、工作及为人处世上的宝贵经验，倾心指 导我、教育我，为我树立了优秀的学--j榜样。 衷心感谢应美丹副教授。作为我的带教老师， 她十分严格地指导我的科研实 验及论文写作，同时教导我为人处事，让我收获良多。同时在生活中，应老师也 经常鼓励我、帮助我克服各种困难并渡过难关，我会铭记一生。 衷心感谢吴昊姝、朱虹、周慧君、罗沛华、丁玲、曹戟、杨晓春、翁勤洁、 施姗姗、吴洪海、裘妮及徐丹等老师对我的学习、科研、生活上的关心和帮助。 没有你们，我的科研工作不会顺利完成。 衷心感谢张蕾、丁婉婧、司梅梅、张俊、楼斯悦、林冠宇、钟理科、李杨玲 等师兄师姐对我科研上的指导和生活上的帮助；感谢谭笔琴、谢楠、吴也平、闫 优优、王翊洁等同窗好友陪伴我度过难忘的求学生涯；感谢邵雪晶、董容、粱桂 开、曹汉迪、庄林翰、齐晓甜、徐志飞、刘宇佳、周甜伊、鲜苗、陈小冰、项丹 艳以及其他未提及的实验室所有成员的陪伴，学习和生活在这样一个大家庭中是 我的万分荣幸。 我最想要感谢的是我的父母和家人，每当我遇到喜悦或困难，都可以毫无保 留地与你们分享，你们是我心灵的港湾和最温暖的依靠! 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 ATRA通过调控肿瘤相关巨噬细胞极化抑制骨肉瘤 转移的作用研究 浙江大学药学院1 2级药理学 博士研究生：周倩 导师：何俏军教授 中文摘要 研究目的：骨肉瘤是一种好发于儿童或青少年时期最常见的高度恶性骨肿瘤，高 转移潜能是骨肉瘤最主要的特性，也是当前限制患者生存率进一步提高的关键因 素。因此如何有效地控制转移的发生一直是骨肉瘤治疗研究领域的前沿热点。抑 制肿瘤相关巨噬细胞(TAM)M2型极化的抗肿瘤转移策略受到广泛关注，但在骨 肉瘤的研究中尚处于起步阶段，特别是TAM的M2型极化对骨肉瘤转移的影响尚 未见文献报道。近年来研究报道全反武维甲酸(ATRA)可抑制多种肿瘤的侵袭和 转移过程，但其分子机制并不明确，也无其抗骨肉瘤转移的相关报道。本部分研 究将首先考察巨噬细胞M2型极化对骨肉瘤转移的影响，然后以巨噬细胞极化为模 型研究ATRA对巨噬细胞极化的调控作用，并深入探讨ATRA对骨肉瘤转移的实 验治疗作用，最后阐明ATRA抑制骨肉瘤转移的分子机制。本课题旨在明确巨噬 细胞极化调控骨肉瘤转移的作用，并阐明ATRA干预巨噬细胞极化和骨肉瘤转移 的分子机制，为抗骨肉瘤转移的治疗提供新思路。 研究方法：本研究采用小鼠巨噬细胞和骨肉瘤细胞株作为研究对象。(1)SRB法 检测ATRA对巨噬细胞增殖以及巨噬细胞条件培养基对骨肉瘤细胞增殖的影响；(2) 通过流式细胞术检测巨噬细胞膜表面抗原F4／80、CD206和CD86的表达来考察 ATRA对巨噬细胞极化的影响；(3)HE染色检测骨肉瘤的肺转移灶点；(4)免 疫组化检测肿瘤石蜡组织切片中巨噬细胞相关蛋白和MMPl2蛋白的表达；(5)免 II 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 疫荧光染色检测冰冻切片样本中巨噬细胞相关蛋白在肿瘤转移组织里的表达；(6) Real．time PCR检测M1和M2型两类巨噬细胞相关基因的mRNA表达水平；(7) Transwell小室法和划痕修复检测骨肉瘤细胞的运动迁移及侵袭能力；(8)建立鼠 源性骨肉瘤细胞K7M2wT的balb／c小鼠尾静脉或原位接种模型来模拟骨肉瘤肺转 移情况，考察巨噬细胞对骨肉瘤转移的影响以及ATRA抗骨肉瘤转移的作用；(9) 表达谱芯片分析相关差异基因的表达；(10)ELISA检测相关基质金属蛋白酶的分 泌情况。 研究结果：(1)采用尾静脉注射的方式将鼠源性骨肉瘤细胞株K7M2 wT单独或与 巨噬细胞混合后接种于balb／c小鼠建立了骨肉瘤肺转移模型，在此模型上研究发 现M2型巨噬细胞可以促进骨肉瘤肺转移的发生。(2)体外采用传代巨噬细胞系 RAW264．7和原代巨噬细胞BMDM，应用经