b型流感病毒诱发天然免疫应答及m1核质穿梭对于病毒复制的调控研究微生物学专业论文.docxVIP

摘要摘要 摘要 摘要 与A型流感病毒常引起世界大流行相比，B型流感病毒一般引起局部流行， 严重情况下可致人死亡。作为一种重要的流行病病因，B型流感病毒的复制机理 及免疫学特征仍有待于研究。病毒感染机体后，首先触发机体的天然免疫应答。 细胞感染实验发现，在B型流感病毒感染早期，I型l口III型干扰素、干扰素诱导 基因以及前炎症因子等细胞因子快速并且高水平表达。RIG．I是细胞内重要的 RNA病毒核酸受体，利用CRISPR／Cas9技术敲除细胞内R／G一，基因以后，我们发 现B型流感病毒感染后RIG—I下游转录因子NF—r,B、IRF3和STATl的磷酸化水 平及细胞因子表达量急剧下调，显示B型流感病毒诱导的细胞因子产生是RIG．I 通路依赖型。进一步实验发现，B型流感病毒在感染早期促进RIG—I及其E3泛素 连接酶TRIM25的线粒体定位，并且强烈诱导RIG．I Lys63(K63)连接的聚泛素化 修饰。同时，TRIM25与B型流感病毒NSl蛋白(NSl一B)N端RNA结合结构域 (RBD)结合，与RIG—I形成RIG—I／TRIM25／NSl．B复合物，阻止了NSl．B C端效 应结构域(TED)对RIG．I泛素化的抑制，从而保证RIG—I能迅速发生泛素化修 饰。综上所述，在B型流感病毒感染早期，RIG．I迅速发生调节性泛素化修饰， 并定位于线粒体向下游传导信号，引起下游转录因子的活化，细胞因子大量产生。 其中，TRIM25发挥对信号通路的正向调节作用。 B型流感病毒是由8条单负链RNA组成的囊膜病毒。其基因组共编码13种蛋 白，其中基质蛋白M1(BMl)除了作为病毒结构蛋白外，是否参与对病毒复制 的调控尚不清楚。通过对BMl在B型流感病毒感染早期和晚期存在核质穿梭现 象的观察，我们鉴定出BMl序列上存在两个CRMl依赖的出核信号肽(NEs)(3．14 位氨基酸和124—133位氨基酸)和1个入核信号肽(NLS)(76—94位氨基酸)， 并找出了关键性的氨基酸位点。同时利用质谱分析发现了BMl蛋白NLS存在2 个位点的磷酸化修饰，即Thr80(T80)和Ser84(S84)。进一步研究发现，T80和 $84的磷酸化修饰促进EGFP—NLS的入核，并促进BMl与细胞核运输蛋白importin 0【l的结合。反向遗传实验表明，突变BMl NES、NLS关键氨基酸位点和磷酸化 位点后，病毒无法进行包装，说明这些位点在B型流感病毒复制过程中发挥着关 万方数据 摘要键的作用。 摘要 键的作用。 关键词：B型流感病毒，RIG．I，TRIM25，泛素化，细胞因子，BMl蛋白，NLS， NES，磷酸化 万方数据 AbswactAbstract Abswact Abstract Host innate immunity response is initiated upon virus invasion．Here，we report that robust production of type I and III interferons(IFNs)，IFN-stimulated genes(ISGs)， and preinflammatory factors can be induced by influenza B virus infection rather than influenza A virus in alveolar epithelial cells(A549)during early infection．This response is mainly dependent on RIG·-I—-mediated signal pathway．The infection by influenza B virus promotes intense Lys 63-linked ubiquitination of RIG—I，resulting in cytokine eruption．It is known that influenza A virus NS 1 protein fNS 1．A1 interacts with RIG—I and TRIM25 respectively to suppress the activation of RIG—I—mediated signaling．However,the present results indicate that influenza B virus NS 1 protein (NS 1一B)is unable to interact with RIG—I but engages in the formation of a RIG—I／TRIM25／NS 1一B