第三章 培养基的灭菌.pptVIP

培养基的灭菌 李昆太 江西农业大学生物科学与工程学院 第一节 严格消毒灭菌 控制有害微生物主要有以下几种措施 1. 影响灭菌效果的因素 微生物种类：不同的微生物D值和Z值不同。 初始菌量：在保持N值不变的前提下，t与初始菌量N0的对数成正比。 传热与混合状况：影响受热均匀度。 设备中污垢及培养基中固体颗粒的存在：影响热穿透。 蒸汽中空气和水分的存在：降低蒸汽分压和灭菌温度。 pH：酸性pH下可加快微生物热死速率。如pH4.5与pH6.5相比，有效灭菌时间可缩短4/5。 各种微生物的耐热水平 * 在发酵生产中，为什么要进行灭菌操作？ 1、由于杂菌的污染，使生物反应中的培养物质因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降； 2、由于杂菌所产生的一些代谢产物，或在染菌后改变了培养液的某些理化特性，使产物 的提取和分离变得困难，造成收率降低或使产品的质量下降； 3、杂菌会大量繁殖，会改变反应介质的PH值，从而使生物反应发生异常变化； 4、杂菌可能会分解产物，从而使生产过程失败； 5、发生噬菌体污染，微生物细胞被裂解，而使生产失败，等等。 一、灭菌的原理和方法 消毒与灭菌的区别？ 消毒与灭菌在发酵工业中均有广泛应用。 消毒是指用物理或化学方法杀死物料、容器、器具内外的病源微生物。一般只能杀死营养细胞而不能杀死细菌芽孢。例如，用于消牛奶、啤酒和酿酒原汗等的巴氏消毒法，是将物料加热至60℃维持30min，以杀死不耐高温的物料中的微生物营养细胞。 灭菌是用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。 消毒不一定能达到灭菌要求，而灭菌则可达到消毒的目的。 1、化学试剂灭菌法 化学试剂：甲醛、乙醇或新洁尔灭、高锰酸钾等 适用范围：环境空气、皮肤及器械的表面消毒 2、射线灭菌法 3、干热灭菌法 电磁波、紫外线或放射性物质 适用范围：无菌室、接种箱 常用烘箱，灭菌条件为在160℃下保温1h 适用范围：金属或玻璃器皿 4、湿热灭菌法 利用饱和蒸汽进行灭菌、条件为：121℃，30min 适用范围：广泛应用于生产设备及培养基的灭菌 例：高压灭菌锅 5、过滤除菌法 利用过滤方法阻留微生物 适用范围：制备无菌空气 6、火焰灭菌法 火焰 适用范围：接种针、玻璃棒、三角瓶口 酒精灯 二、湿热灭菌原理 湿热灭菌原理 灭菌条件 灭菌不利方面 由于蒸汽具有很强的穿透能力，而且在冷凝时会放出大量的冷凝热(潜热)，很容易使蛋白质凝固而杀死各种微生物。 121℃，30min。 同时也会破坏培养基中的营养成分，甚至会产生不利于菌体生长的物质。因此，在工业培养过程中，除了尽可能杀死培养基中的杂菌外，还要尽可能减少培养基中营养成分的损失 6s 134 蒸汽 VI 极端耐热菌的细菌芽孢 8~12 121 蒸汽 V 嗜热脂肪芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、其他芽孢杆菌的芽孢 5 105 蒸汽 15 100 0.5%苏打煮沸 IV 炭疽杆菌芽孢 15~30 100 煮沸 IV 炭疽杆菌芽孢，大多数真菌孢子 5 100 煮沸 III 肝炎病毒 30 80 温热灭菌 II 大多数细菌、酵母、霉菌的营养细胞，除肝炎病毒外的所有病毒 15s 72 巴士德灭菌 I 结核分支杆菌，立克次实体，考克斯氏体，脊髓灰质炎病毒 30 61.5 巴士德灭菌 I 结核分支杆菌，链球菌，李斯特氏菌，脊髓灰质炎病毒 灭菌时间(min) 灭菌温度℃ 有效灭菌方法 耐热水平 微生物 2、 微生物的死亡速率：对数残留定律 微生物受热死亡的原因，主要是因高温使微生物体内的一些重要蛋白质，如酶等，发生凝固、变性，从而导致微生物无法生存而死亡。微生物受热而丧失活力，但其物理性质不变。 在一定温度下，微生物的受热死亡遵照分子反应速度理论。在灭菌过程中，活菌数逐渐减少，其减少量随残留活菌数的减少而递减，即微生物的死亡速率与任一瞬时残存的活菌数成正比。 式中，N—残存的活菌数；t—灭菌时间（s）；K—灭菌速度常数（s-1），也称反 应速度常数或比死亡速度常数，此常数的大小与微生物的种类与加热温度有关； dN/dt—活菌数瞬时变化速率，即死亡速率。 积分得： 式中：N0—开始灭菌（t=0）时原有活